鷹嘴豆異黃酮抑制酪氨酸酶及其包合性能研究.pdf

1、鷹嘴豆(CicerarietinumL)豆科鷹嘴豆屬，因其面形奇特，尖如鷹嘴而得此名。別名桃豆、雞碗豆，新疆俗稱諾胡提，又稱桃爾豆，耐干旱、耐貧瘠，是目前世界上栽培面積較廣的食用豆類作物之一，為世界第二大消費(fèi)豆類，在我國新疆已有2500年的栽培歷史。研究表明鷹嘴豆具有廣泛的生理活性，如防癌、降血脂、保護(hù)心血管功能等，其化合物的提取及其保健食品的開發(fā)具有廣闊的前景，其中重要的營養(yǎng)成分鷹嘴豆異黃酮(CAI)含量達(dá)到0.33％。鷹嘴豆異黃酮能

2、有效防止癌細(xì)胞增殖，具有調(diào)節(jié)血脂預(yù)防心血管疾病、改善骨質(zhì)疏松等功效。目前，無論是國內(nèi)還是國外關(guān)于鷹嘴豆的研究很少，而對(duì)鷹嘴豆異黃酮的包合和應(yīng)用性能方面的研究更是少之又少。
　　 由于異黃酮含有酚羥基，化學(xué)反應(yīng)性強(qiáng)，穩(wěn)定性差，光和熱足以促使其分解，失去抗氧化活性和其他生物學(xué)功能，使其在貯存和應(yīng)用中也受到一定的限制。與環(huán)糊精形成包合物后，將顯著改善藥物的理化性質(zhì)。本課題研究了從鷹嘴豆中提取異黃酮的具體工藝，取發(fā)芽后的鷹嘴豆用石油醚脫

3、脂，然后選用65％乙醇為提取劑，在85℃下，提取2次（每次2小時(shí)），乙酸乙酯萃取后用大孔吸附樹脂進(jìn)行精制，得到較純的鷹嘴豆異黃酮精品，并對(duì)照鷹嘴豆芽素A進(jìn)行紫外掃描，確定260nm為其最大吸收波長。
　　 用研磨法制備β-環(huán)糊精及羥丙基-β-環(huán)糊精與鷹嘴豆異黃酮的包合物，由紅外吸收光譜對(duì)包合物進(jìn)行表征。運(yùn)用飽和溶液法和紫外分光光度法測試包合體系的溶解度，并測定鷹嘴豆異黃酮在不同濃度的β-環(huán)糊精及羥丙基-β-環(huán)糊精溶液下吸光度的變

4、化，根據(jù)Benesi-Hildebrand方程確定了包合反應(yīng)的包合比為1∶1、表觀包合穩(wěn)定常數(shù)Kθf和包合反應(yīng)的熱力學(xué)參數(shù)ΔGθ，△Hθ和△Sθ，并由此得出包合反應(yīng)主要由焓變控制，推動(dòng)力為范德華力。
　　 在30℃，pH=6.8的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖體系中，分別以L-酪氨酸和L-3，4-二羥基本氨酸(L-DOPA)為底物，通過測定不同濃度提取物加入量的條件下吸光度隨時(shí)間的變化，來研究鷹嘴豆異黃酮提取物對(duì)酪氨酸酶單酚

5、酶及二酚酶活性的抑制動(dòng)力學(xué)效應(yīng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，鷹嘴豆異黃酮對(duì)酪氨酸酶單酚酶和二酚酶都有良好抑制作用，對(duì)單酚酶和二酚酶活力的相對(duì)抑制率達(dá)到50％的鷹嘴豆異黃酮濃度(IC50)約分別為0.07mg/mL和0.03mg/mL;在降低酪氨酸酶酶活的同時(shí)，鷹嘴豆異黃酮能明顯延長單酚酶的遲滯時(shí)間，0.08mg/mL鷹嘴豆異黃酮能使其遲滯時(shí)間由1.26min延長至2.62min。通過Lineweaver-Burk圖顯示鷹嘴豆異黃酮對(duì)二酚酶的抑制作用表