茶多糖的定量、定性及生物活性研究.pdf

1、本文對茶多糖(TPS)的提取工藝、定量方法、指紋圖譜以及不同純度的TPS的降血糖、降血脂、抗癌等生物活性進(jìn)行了相關(guān)研究。 采用二次響應(yīng)面方法(response surface analysis，RSA)對水法提取TPS的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化。在浸提時(shí)間、浸提溫度、料水比3個(gè)因素中，浸提溫度對TPS的提取率的影響程度達(dá)到高度顯著水平。TPS提取率與浸提溫度、料水比、浸提時(shí)間的二次回歸曲面為鞍面，需要通過嶺嵴分析找出最佳提取工藝條件。

2、嶺嵴分析的結(jié)果結(jié)合實(shí)際操作的便利，將水浸提TPS最佳條件修正為提取溫度80℃、浸提時(shí)間1.5 h、料水比1：20時(shí)，實(shí)際測得的提取率為1.22％，與理論預(yù)測值相比相對誤差在2％左右。因此，采用RSA法優(yōu)化得到的浸提條件參數(shù)準(zhǔn)確可靠，具有實(shí)用價(jià)值。 采用果膠酶、胰蛋白酶以及復(fù)合酶等3種提取法和不加酶水浸提法為對照，提取嶗山粗老綠茶中的TPS。結(jié)果表明，復(fù)合酶提取法的提取率最高，達(dá)到5.17±0.17％。對4種工藝獲得的TPS，分別

3、測定其多糖含量、單糖組成、氨基酸組成。結(jié)果表明4種工藝對提取的TPS的單糖組成種類影響不大。4種工藝獲得的TPS的總糖含量由高到低依次為果膠酶法、復(fù)合酶法、胰蛋白酶法以及不加酶水浸提法，其中果膠酶法獲得的TPS總糖含量高達(dá)95.26±4.09％，但其糖醛酸含量比其他3種工藝顯著降低。4種工藝對提取的TPS的氨基酸組成種類影響亦不大，但對各氨基酸的含量有較大的影響。果膠酶法、胰蛋白酶法提取的TPS的各氨基酸含量與不加酶水浸提法的相比有較大

4、的減少。 按統(tǒng)一的TPS提取工藝對不同等級的綠茶(龍井特級、龍井1～4級)及不同茶類(綠茶、烏龍茶、黑茶和紅茶)樣品中的TPS進(jìn)行分離純化，并對分離純化后的各TPS樣品進(jìn)行了組成分析。發(fā)現(xiàn)從不同的茶葉中分離純化得到的TPS含有相同的單糖組成和氨基酸組成。TPS的多糖部分主要由阿拉伯糖、半乳糖和葡萄糖以摩爾比1：1：0.5組成，TPS中的糖醛酸含量在17～23％之間；蛋白質(zhì)部分由16種常見氨基酸組成，其中Val.Ala，Gly，G

5、lu為主要部分。在該結(jié)果的基礎(chǔ)上，以純化后的TPS純品作為標(biāo)準(zhǔn)與苯酚一硫酸反應(yīng)，以吸光值和TPS質(zhì)量作圖獲得相關(guān)系數(shù)為0.9961的標(biāo)準(zhǔn)曲線。該方法的TPS回收率為84.88 to95.7％標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.53％。從而建立了夠快速和可靠的定量分析綠茶和烏龍茶中TPS的方法。高效凝膠滲透色譜和成分分析揭示了綠茶中3種不同純度的TPS產(chǎn)品：TPSⅠ、TPS Ⅱ和TPSⅢ的分子量分布和組成，表明100～120 KDa的組分(主要由阿拉伯半乳聚糖

6、蛋白組成)在TPS Ⅰ、TPS Ⅱ and TPS Ⅲ中所占比重逐漸增加，分別約為30％、60％和90％。 建立了綠茶TPS的紅外二階導(dǎo)數(shù)指紋圖譜。TPS Ⅰ、 TPS Ⅱ和TPSⅢ的紅外二階導(dǎo)數(shù)圖譜中在1075、1045 cm<'-1>均有吸收峰，它們分別是阿拉伯半乳聚糖蛋白主鏈半乳糖吡喃環(huán)和側(cè)鏈阿拉伯呋喃環(huán)的特征吸收峰，并且吸收峰的峰強(qiáng)隨綠茶TPS的純度的提高而加強(qiáng)。 向量夾角余弦法被用于評估兩光譜指紋圖譜的相似度。

7、每一光譜被認(rèn)為是向量空間的一向量，它們的相似度用向量夾角公式計(jì)算得出。兩向量的cosθ值越接近1，它們的相似度就越大。本文采用紅外二階導(dǎo)數(shù)光譜1200-800 cm<'-1>區(qū)域計(jì)算TPS光譜的相似度。TPS Ⅱ和TPS Ⅲ的cos0值是0.82，TPS Ⅰ和TPS Ⅲ的cos0值是0.26，TPS Ⅱ和TPS Ⅰ的cosθ值是0.52。其它綠茶TPS Ⅱ與標(biāo)準(zhǔn)TPS Ⅲ之間cos0值在0.7～0.9之間。而其它樣品與TPS Ⅲ的cos

8、θ值計(jì)算出來后能夠通過該值簡單快速的區(qū)分開。至此，向量夾角余弦法提供了一種有效的綠茶TPS的質(zhì)量控制方法。 TPS Ⅰ、TPS Ⅱ和TPS Ⅲ對四氧嘧啶誘導(dǎo)的糖尿病小鼠的降血糖效果。檢測了它們對四氧嘧啶誘導(dǎo)的糖尿病小鼠的空腹血糖值、糖化血清蛋白和丙二醛水平的影響。結(jié)果表明，與對照組相比TPS Ⅰ、TPS Ⅱ和TPS Ⅲ能夠顯著的降低四氧嘧啶誘導(dǎo)的糖尿病小鼠空腹血糖值、糖化血清蛋白水平。經(jīng)過14天治療，這3種純度的TPS能顯著的降

9、低四氧嘧啶誘導(dǎo)的糖尿病小鼠的口腹葡萄糖耐量。TPS Ⅱ在800：mg/kg.d和TPS Ⅰ在400 mg/kg.d時(shí)均能顯著的預(yù)防四氧嘧啶誘導(dǎo)的高血糖。綜合以上，結(jié)果表明綠茶TPS，一種水溶性的阿拉伯半乳聚糖蛋白，是茶葉中的主要降糖因子。 TPS Ⅰ、TPS Ⅱ和TPS Ⅲ的體外抗氧化活性研究表明它們清除羥基自由基和超氧陰離子的能力隨著TPS純度的提高而降低。 研究了TPS Ⅰ、TPS Ⅱ和TPS Ⅲ對大鼠高血脂癥的預(yù)防和降低作

10、用。考察了它們對血清總甘油三酯、總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇含量。結(jié)果，綠茶TPS對高血脂癥大鼠血清TG、HDL-C、LDL-C水平無顯著影響。只有TPS Ⅲ對高血脂癥大鼠有顯著的降低總膽固醇的作用。并且TPS Ⅲ能顯著的增強(qiáng)高血脂癥的抗氧化能力。3種TPS產(chǎn)品對高血脂癥大鼠的肝臟中的微量元素有影響，能顯著增加它們的鎂、銅、鋅含量以及提高它們鋅/銅比值。暗示綠茶。TPS對高血脂癥可能有調(diào)節(jié)作用。 研究了TPS