高血壓肝陽(yáng)上亢證患者血清miRNAs表達(dá)的研究.pdf

1、目的：通過(guò)對(duì)比肝陽(yáng)上亢證高血壓患者、非肝陽(yáng)上亢證高血壓患者及正常人血清中微小RNA(microRNA，miRNA)的表達(dá)譜的不同，明確高血壓病肝陽(yáng)上亢證與miRNA之間是否存在相關(guān)性，探索高血壓肝陽(yáng)上亢證患者血清中是否存在特異性表達(dá)的一個(gè)miRNA或幾個(gè)miRNAs。
　　方法：1.在本院體檢中心及心內(nèi)科門(mén)診收集初發(fā)高血壓病或非初發(fā)但是未服用降壓藥的高血壓患者及健康體檢者的空腹血清，將所收集的病例分為三組，分別是肝陽(yáng)上亢組、非肝陽(yáng)

2、上亢組、健康組。
　　2.分別抽取肘靜脈血5ml，存于無(wú)抗凝的干燥試管，3000r/min離心10分鐘，抽取血清，-30℃凍存。采用Trizol LS法提取血清中RNA，按照miRNeasy Mini Kit操作手冊(cè)，使用吸附柱進(jìn)行RNA的富集。
　　3.利用Solexa測(cè)序方法對(duì)以上3組樣本進(jìn)行基因測(cè)序分析，檢測(cè)出肝陽(yáng)上亢組與非肝陽(yáng)上亢組、肝陽(yáng)上亢組與正常人群組、非肝陽(yáng)上亢組與正常組之間差異表達(dá)的基因。
　　4.利用

3、miRNA在線(xiàn)預(yù)測(cè)軟件miRWalk2.0整合肝陽(yáng)上亢組與非肝陽(yáng)上亢組、肝陽(yáng)上亢組與正常人群組中共有的差異表達(dá)miRNA，篩選出可能與肝陽(yáng)上亢證相關(guān)的miRNAs。
　　5.使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)篩選出的miRNAs在各組的表達(dá)量，包括其濃度及總量。
　　結(jié)果：發(fā)現(xiàn)肝陽(yáng)上亢組與正常組的miRNA的表達(dá)量均存在明顯差異(P＜0.01);肝陽(yáng)上亢組與非肝陽(yáng)上亢組比較miRNA的表達(dá)量也存在明顯差異(P＜0.01);非肝陽(yáng)上亢

4、組與正常組比較miRNA的表達(dá)量無(wú)差異(P=0.26,P＞0.05)。肝陽(yáng)上亢組與非肝陽(yáng)上亢組miRNA的濃度比較存在明顯差異(P＜0.01);肝陽(yáng)上亢組與正常組miRNA的濃度比較也存在明顯差異(P＜0.01);非肝陽(yáng)上亢組與正常組miRNA的濃度比較無(wú)明顯差異，(P=0.15，P＞0.05)。肝陽(yáng)上亢組與正常組:共檢測(cè)到miRNA1037個(gè)，其中差異表達(dá)的miRNA有653個(gè)(P＜0.05)，表達(dá)下調(diào)的miRNA223個(gè)，表達(dá)上調(diào)的

5、miRNA430個(gè);非肝陽(yáng)上亢組與正常組:共檢測(cè)到miRNA963個(gè)，其中差異表達(dá)的miRNA有573個(gè)，表達(dá)下調(diào)的miRNA256個(gè)，表達(dá)上調(diào)的miRNA317個(gè);肝陽(yáng)上亢組與非肝陽(yáng)上亢組:共檢測(cè)到miRNA957個(gè)，其中差異表達(dá)的miRNA有720個(gè)，表達(dá)下調(diào)的miRNA277個(gè)，表達(dá)上調(diào)的miRNA433個(gè)。結(jié)果在高表達(dá)的基因群中發(fā)現(xiàn)miR-126。熒光定量結(jié)果顯示肝陽(yáng)上亢組miR-126的表達(dá)顯著高于非肝陽(yáng)上亢組與正常組(P＜0