平肝潛陽法治療高血壓肝陽上亢證大鼠下丘腦、腎上腺的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的: 1.建立正常大鼠、高血壓肝陽上亢證大鼠及高血壓肝陽上亢證平肝潛陽法治療后大鼠的下丘腦和腎上腺組織雙向凝膠電泳圖譜。 2.觀察高血壓肝陽上亢證大鼠平肝潛陽法治療前后下丘腦及腎上腺的蛋白質(zhì)表達差異，從蛋白質(zhì)組學(xué)水平探討其降血壓和改善肝陽上亢證癥狀的分子機制，為尋找新的藥物標(biāo)志蛋白提供理論依據(jù)。 方法: 1.以SHR大鼠加灌服附子湯法制備高血壓肝陽上亢證大鼠模型。 2.二維凝膠電泳分離大鼠下丘腦

2、及腎上腺蛋白質(zhì)，凝膠經(jīng)考染顯色后，PDQuest圖像分析軟件進行比較分析，獲得差異表達蛋白質(zhì)。 3.利用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜和數(shù)據(jù)庫分析鑒定差異表達蛋白質(zhì)。 結(jié)果: 1.動物模型的復(fù)制：模型組和PGQYF組大鼠在附子湯灌胃3周后，其易激惹程度發(fā)生變化，多表現(xiàn)為Ⅲ級，且大部分出現(xiàn)了結(jié)合膜充血；飲水量明顯增加；收縮壓明顯升高。與正常對照組及造模前比較，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。經(jīng)PGQYF治療

3、后(第6周末)，其易激惹程度及結(jié)合膜充血均好轉(zhuǎn)，易激惹程度多表現(xiàn)為Ⅰ和Ⅱ級，飲水量及收縮壓較治療前及模型組明顯減少，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。 2.各組總蛋白2-DE圖譜的建立及差異蛋白質(zhì)識別：建立了正常大鼠、高血壓肝陽上亢證大鼠及平肝潛陽法治療后大鼠重復(fù)性好的下丘腦和腎上腺組織蛋白質(zhì)組表達圖譜。通過PDQuest圖像分析，發(fā)現(xiàn)了27個差異表達蛋白質(zhì)點：和正常組比較，肝陽上亢模型組下丘腦圖譜中1、2、4、5、7、8號

4、蛋白質(zhì)點、腎上腺圖譜中2、3、5、6、7號蛋白質(zhì)點表達上升2倍及以上，且其在PGQYF組中表達下降2倍及以上，大致處于與正常組同一水平或低于正常對照組低；肝陽上亢模型組下丘腦圖譜中3、6、9、10、11、12、13、14、15號蛋白質(zhì)點、腎上腺圖譜中1、4、8、9、10、11、12號蛋白質(zhì)點表達下降2倍及以上，且同一點在PGQYF組中表達上升2倍及以上，大致處于與正常組同一水平或高于正常對照組。 3.差異蛋白質(zhì)點質(zhì)譜鑒定及蛋白功

5、能分類：選取25個蛋白質(zhì)點進行質(zhì)譜鑒定，成功鑒定22個蛋白質(zhì)點。根據(jù)NCBI、MSDB數(shù)據(jù)庫中提供的信息，這些差異蛋白質(zhì)涉及多種蛋白種類，如參與能量代謝的酶類、抗氧化蛋白、神經(jīng)內(nèi)分泌相關(guān)蛋白、細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白、細胞骨架相關(guān)蛋白等。其中硫氧還蛋白過氧化物酶-Ⅱ(PRX-Ⅱ)、熱休克蛋白-27(HSP-27)、膜聯(lián)蛋白-A1(Annexin-A1)等蛋白可能與高血壓肝陽上亢證及平肝潛陽治療法密切相關(guān)。 結(jié)論: 平肝潛陽法治療