組織細(xì)胞DNA降解與死亡時(shí)間的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:摸索運(yùn)用末端轉(zhuǎn)移法、原位末端標(biāo)記法及瓊脂糖電泳法研究機(jī)體死后不同時(shí)間段DNA的降解程度及規(guī)律，探討該規(guī)律在推斷死亡時(shí)間方面的可行性，為實(shí)際工作中推斷死亡時(shí)間提供一個(gè)科學(xué)的依據(jù)。 方法:取SD大白鼠，頸椎錯(cuò)位處死，置于室溫20℃的環(huán)境下，在死后不同時(shí)間段(0h、1h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、14h、24h、36h及48h)取材，所取檢材為肝、腎、脾，按照取材死后時(shí)間段的不同分為12組。課題共分三個(gè)部分:第一部分：

2、運(yùn)用末端轉(zhuǎn)移法檢測(cè)DNA降解：剪碎組織，酚氯仿提取組織DNA；紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在260nm、280nm波長(zhǎng)處檢測(cè)DNA提取液的吸光度值，獲得DNA的純度和濃度；每個(gè)死亡時(shí)間段均取1ug DNA，加入5U TdT酶、5nmoldUTP，在37℃水浴中相互反應(yīng)1h；用無(wú)水乙醇和乙酸銨共沉淀DNA，保留液體：紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在260nm波長(zhǎng)處檢測(cè)液體中反應(yīng)剩余的dUTP的吸光度。第二部分：運(yùn)用原位末端標(biāo)記法檢測(cè)DNA降解：組織用10％中性

3、多聚甲醛固定；常規(guī)脫水、透明、石蠟包埋，切片；組織印片制作，甲醛固定；用細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒檢測(cè)，步驟按照試劑盒說(shuō)明書(shū)；脫水、透明、中性樹(shù)酯封片；顯微鏡下觀察，拍照，圖像分析。第三部分：酶切瓊脂糖電泳檢測(cè)DNA降解：取1ug DNA加2U MluI酶，酶切后瓊脂糖電泳，溴化乙錠染色，觀察結(jié)果。 結(jié)論:機(jī)體死后組織細(xì)胞DNA隨死亡時(shí)間延長(zhǎng)而不斷降解，并具有一定的規(guī)律性。末端轉(zhuǎn)移法與原位末端標(biāo)記法都具有敏感性強(qiáng)、易操作等優(yōu)點(diǎn)，綜合運(yùn)用，可