辛伐他汀改善高脂飲食引起的腎臟損傷的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　1.觀察高脂飲食（HFD）能否誘導(dǎo)SD大鼠腎臟發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)及病理學(xué)變化，以及辛伐他?。⊿IM）是否通過(guò)改變大鼠體內(nèi)脂聯(lián)素及其受體的表達(dá)來(lái)改善大鼠腎臟的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。
　　2.研究棕櫚酸（PA）是否誘導(dǎo)人胚腎上皮細(xì)胞（HEK293T）產(chǎn)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)及在藥物辛伐他?。⊿IM）干預(yù)下是否通過(guò)脂聯(lián)素受體的上調(diào)表達(dá)激活A(yù)MPK與PPARα通路起到保護(hù)作用。
　　方法：
　　1.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)部分：

2、將大鼠隨機(jī)分為正常飲食組（SCD）、高脂飲食組（HFD）和高脂飲食加辛伐他汀療組（HFD+ST），用5個(gè)月高脂飲食建立SD大鼠高脂血癥模型，辛伐他汀灌胃治療2月。每周稱(chēng)量大鼠體重，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后測(cè)定血清生化指標(biāo)HDL-C、LDL-C、TG、TC；HE染色觀察腎臟組織病理學(xué)改變，Masson染色檢測(cè)腎臟膠原纖維變化；油紅O染色檢測(cè)腎臟脂質(zhì)沉積；定量Q-PCR分析大鼠腎臟中CHOP、GRP78及Adiponectin基因在各組的表達(dá)情況；RT-

3、PCR分析各組腎臟組織中炎癥因子IL-6及TNF-α表達(dá)變化；Western blot法檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物CHOP、GRP78、IRE1α、AdipoR1、AdipoR2、PPARα、AMPK的蛋白表達(dá)以及p-AMPK的變化；免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CHOP、GRP78、AdipoR1、AdipoR2蛋白的表達(dá)。
　　2.體外實(shí)驗(yàn)部分：將培養(yǎng)的HEK293T細(xì)胞分為正常對(duì)照組（CON），棕櫚酸組（PA），棕櫚酸+辛伐他汀干預(yù)組（PA+S

4、T），正常對(duì)照+AMPK激動(dòng)劑（CON+AICAR），棕櫚酸+AMPK激動(dòng)劑組（PA+AICAR），正常對(duì)照+PPARα激動(dòng)劑（CON+FF），棕櫚酸+PPARα激動(dòng)劑組（PA+FF），四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）比色法檢測(cè)不同濃度棕櫚酸和辛伐他汀組的細(xì)胞增殖；各組細(xì)胞進(jìn)行HE染色；Western blot法檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物CHOP、GRP78、IRE1α、AMPK、PPARα、AdipoR1、AdipoR2的蛋白表達(dá)以及p-AMPK的

5、變化；免疫組化分析CHOP、GRP78、IRE1α、AdipoR1、AdipoR2的表達(dá)，結(jié)合Western blot分析相關(guān)蛋白在各組細(xì)胞中的定位及定量表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　1.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)部分：5月HFD飲食后，與SCD組相比：①HFD組大鼠體重明顯高于SCD組；②HFD組大鼠血清TC、TG、LDL-C顯著增高，HDL-C明顯降低；③HE及Masson染色顯微觀察顯示：HFD組腎小球細(xì)胞數(shù)增多，系膜細(xì)胞與系膜基質(zhì)增多，

6、進(jìn)而腎小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)水腫、空泡變性，腎小球體積增大，腎小管出現(xiàn)大量藍(lán)染膠原纖維；④油紅染色顯示HFD組腎臟脂質(zhì)沉積顯著增加，并達(dá)顯著差異；⑤CHOP、GRP78、IRE1α蛋白表達(dá)明顯高于SCD組，CHOP、GRP78的基因表達(dá)也明顯高于SCD組，p-AMPK、PPARα表達(dá)顯著降低；⑥AdipoR1、AdipoR2蛋白表達(dá)是下降的且與脂聯(lián)素基因表達(dá)呈正相關(guān)；⑦SIM灌胃治療2月，與HFD組相比，顯著降低大鼠體重，逆轉(zhuǎn)血脂水平改變，明

7、顯改大鼠腎臟病理學(xué)變化，CHOP和GRP78基因表達(dá)顯著降低，各蛋白表達(dá)CHOP、GRP78、IRE1α明顯降低，p-AMPK、PPARα、AdipoR1、AdipoR2顯著增加；⑧IL-6及TNFα炎癥因子表達(dá)降低。
　　2.體外實(shí)驗(yàn)部分：與CON組相比，①不同濃度PA使HEK293T活力明顯降低，以0.5 mmol/L PA作用24 h最明顯；②PA顯著誘導(dǎo)CHOP、GRP78基因表達(dá)，降低AdipoR1、AdipoR2、Ad

8、iponectin基因的表達(dá)；③CHOP、GRP78、IRE1α表達(dá)顯著增加，p-AMPK、PPARα、AdipoR1、AdipoR2表達(dá)顯著降低；④用AMPK激動(dòng)劑AICAR和PPARα激動(dòng)劑FF預(yù)處理PA組，與單純PA組相比，AMPK與PPARα表達(dá)增加；⑤HE染色表明PA處理的細(xì)胞出現(xiàn)皺縮，免疫組化檢測(cè)表明CHOP、GRP78、IRE1α呈上升趨勢(shì)，AdipoR1、AdipoR2蛋白表達(dá)下降；⑥SIM預(yù)處理PA組后，CHOP、GR

9、P78、IRE1α表達(dá)下降，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激緩解，AdipoR1、AdipoR2蛋白表達(dá)上升。
　　結(jié)論：
　　1.5月的高脂飲食可以成功構(gòu)建大鼠高脂血癥模型和誘導(dǎo)大鼠腎臟發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)，辛伐他汀可明顯緩解上述癥狀，其機(jī)制可能是通過(guò)上調(diào)脂聯(lián)素及其受體R1、R2的表達(dá)、進(jìn)一步激活A(yù)MPK和PPARα通路來(lái)減弱內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，降低炎癥因子的表達(dá)而起到保護(hù)作用。
　　2.棕櫚酸可抑制HEK293T增殖，引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，辛伐他汀可能