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1、湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文構(gòu)建鱖魚多位點(diǎn)基因打靶載體的研究姓名:葉飛娟申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):養(yǎng)殖指導(dǎo)教師:陳斌唐冬生20041001ConstructionofvectorofmultiplelocigenetargetinginSinipercachuatsfYbfeijuanSupervisor:ProfessorChenBinProfessorTangDongshengCollegeofAnimalScience,HunanAgr
2、iculturalUniversityChangsha,Hunan410128,ChinaABSTRACTTransgenictechniqueswithrandomintegrationhaveextremelydecreasedtheefficiencyofintegration,hereditationandexpressionofexternalgenesintransgenicanimalsHoweverthetechniqu
3、esofmultiplelocigenetargetingcouldbeaneffectiveapproachtocovertheaboveproblemInthisprocess,thevectorofmultiplelocigenetargetingwasconstructedThevectorwouldbecrucialforthefurtherresearchofthegenetargetingtechniques/nvivoF
4、irstofall,Primers(HRDSll/HRDSl2andHRDS21/HRDS22)weredesignedtoampli玲homologousrecombinationdirectingsequences(HImSlandHRDS2)usingSPl416TtransportingplasmidastemplateThegainedfragmentswereclonedintopMDl8一TplasmidSecondlHH
5、RDSlandHRDS2onebyonewereclonedintogeneralgenetargetingvectorofpCTKNeotoconstructspecificgenetargetingvectorofpCTKNeo—HRDSl/2forSinipercachuatsiAfterwards,Primers(IFl/IF2)weredesignedtoamplifyhIFNgenefragmentusingpCDNA3hI
6、FNlplasmidastemplate,andthenthegainedfragmentwasclonedintospecificgeuetargetingvectorofpCTKNeoHRDSI/2FinallyThemultiplelocigenetargetingvectorwithhlFNgeneforSinipereaehuatsiwasconstructedwhichwasidentifiedviaPCRamplifica
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