轉Cry1Ab抗蟲基因玉米的分子生物學研究.pdf

1、玉米(Zea mays L.)是世界上重要的糧食作物、飼料原料和能源作物，隨著世界經濟的持續(xù)發(fā)展和人口的不斷增長，我國對玉米的需求量呈增長趨勢。隨著環(huán)境的同益惡化，玉米的病蟲害越來越重。據FAO統(tǒng)計，每年全世界因蟲害造成的玉米損失約占產量的12％，因此提高玉米單產，培育抗病、抗蟲等玉米新品種顯得十分迫切。1996年第一例轉基因作物商業(yè)化種植后，全球轉基因作物種植面積持續(xù)增長，2009年達到1.34億公頃。目前，作物新品種的培育已由傳統(tǒng)的

2、選育逐漸向利用轉基因技術培育方向轉換。
　　 本研究通過基因槍介導法將人工改造的CrylAb抗蟲基因轉入HiⅡB玉米愈傷組織中，獲得轉CrylAb基因陽性玉米苗;通過比較轉CrylAb基因玉米各組織部位CrylAb基因在轉錄水平上的表達量，探討了各組織部位的抗蟲性與玉米生物學特性之間的關系;通過對轉CrylAb基因玉米進行接蟲，探討了CrylAb蛋白表達的有效性，為抗蟲CrylAb基因的研究提供參考。通過調查分析轉CrylAb基

3、因玉米植株的農藝性狀，探討了轉基因玉米和對照玉米植株產量的變化情況，為轉基因玉米的育種工作提供依據。
　　 1、本研究通過基因槍轟擊法成功將人工改造CrylAb基因轉入玉米愈傷組織中，并獲得了轉基因玉米植株，PCR檢測陽性苗為9株;試紙條鑒定Bt蛋白表達的TO代轉基因陽性苗5株;TO代共3株轉基因玉米收獲種子。
　　 2、對轉CrylAb基因玉米自交系T1代到T3代進行PCR和免疫試紙條檢測，獲得穩(wěn)定遺傳的轉CrylAb

4、基因玉米植株;統(tǒng)計T1代至T3代PCR檢測陽性率，與孟德爾的分離規(guī)律相比偏小。造成這種現(xiàn)象的原因可能是由于基因槍轟擊愈傷組織可引起的拷貝數多。
　　 3、本研究通過RT-PCR和熒光定量PCR對穩(wěn)定遺傳的轉CrylAb基因玉米各組織部位CrylAb基因在轉錄水平上的表達進行檢測，結果表明葉片中CrylAb的表達量顯著高于葉鞘和根部。
　　 4、通過統(tǒng)計分析接蟲后轉CrylAb基因玉米和對照組玉米心葉期的蟲孔數及受害程度，

5、將轉CrylAb基因玉米分為高抗和高感。統(tǒng)計分析接蟲后成熟期的玉米植株莖稈和果穗各部位的蟲孔數及受害程度，結果表明，T1至T3代轉CrylAb基因玉米與對照相比，苞葉上的蟲孔數(P＜0.05)，苞葉蟲孔面積(P＞0.05)、莖蟲孔數(P＜0.05)、莖蟲孔面積(P＜0.05)、籽粒受害部位(P＜0.05)和籽粒受害數(P＜0.05)均小于對照組。說明轉CrvlAb基因玉米對玉米螟的抗性顯著高于對照HiⅡB。進一步鑒定了目的性狀的有效性，