蛛絲蛋白工程菌高密度發(fā)酵、表達(dá)產(chǎn)物純化與濕法紡絲.pdf

1、蜘蛛絲尤其是由蜘蛛大囊狀腺產(chǎn)生的拖絲,具有質(zhì)地輕、富有彈性、強(qiáng)度高等優(yōu)良的特性,作為生物材料具有廣泛的應(yīng)用前景,基因工程技術(shù)為大規(guī)模生產(chǎn)蛛絲蛋白提供了可能途徑.該論文研究了重組蛛絲蛋白工程菌的發(fā)酵培養(yǎng)與重組蛛絲蛋白的純化工藝,并制備了重組蛛絲蛋白紡絲液,進(jìn)行了濕法紡絲的嘗試,在國內(nèi)首次報(bào)道了利用重組蛛絲蛋白進(jìn)行紡絲并測定了纖維的部分性能.研究了重組質(zhì)粒pNS2在兩種宿主菌中的搖瓶與10L發(fā)酵罐培養(yǎng)表達(dá)情況,確定了較適的宿主菌為BL21(

2、DE3),采用pH-stat補(bǔ)料分批發(fā)酵,工程菌pNS2/BL21(DE3)最終菌體密度OD<,600>達(dá)71.64,表達(dá)量為0.8g/L.重組蛋白以可溶性的形式表達(dá),等電聚焦電泳測定其等電點(diǎn)為8.5,通過超聲破碎細(xì)胞,調(diào)節(jié)pH5.6,55~60℃加熱4min,20％飽和(NH<,4>)<,2>SO<,4>沉淀等步驟,重組蛋白的純度可達(dá)92%,回收率達(dá)57.5%.建立了簡單、高效的規(guī)模純化工藝.純化的蛋白經(jīng)透析及冷凍干燥后,選擇甲酸作為