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1、該論文主要研究質(zhì)粒pJW566編碼的LlaBIIIR/M系統(tǒng).在含有新生霉素的梯度平板上消除Marker質(zhì)粒pSV2,得到只含有質(zhì)粒pJW566的菌株MG1614[pW566].經(jīng)過(guò)不同限制性內(nèi)切酶的切割和連接,繪制了質(zhì)粒pJW566內(nèi)切酶圖譜,其中質(zhì)粒pJW566上具有唯一的SpeI,SphI,NsiI及SacI的酶切位點(diǎn),含有7個(gè)ClAI酶切位點(diǎn).際制性內(nèi)切酶活性測(cè)定表明,LlaBIII內(nèi)切酶需要Mg<'2+>、ATP,AdoMet
2、對(duì)酶活性有刺激作用,此結(jié)果符合typeI內(nèi)切酶特征,并與LlaBIII基因結(jié)構(gòu)和功能分析一致.但是體內(nèi)切酶活性表達(dá)重復(fù)性較差,經(jīng)過(guò)不同的柱層析均未檢測(cè)到內(nèi)切酶活性,推測(cè)LlaBIII內(nèi)切酶除需上述三種復(fù)合因子外,還需要其它體內(nèi)因子的參與,詳細(xì)機(jī)制有待進(jìn)一步的研究.通過(guò)LlABIII基因的PCR產(chǎn)物及SphI-HindIII片段的克隆與連接,出現(xiàn)了異常的插入處段.造成的原因有待研究.以上研究表明,LlaBIII的基因結(jié)構(gòu)、具有的生物功能及
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