玻璃體液取樣方法及死亡時間推斷的研究.pdf

1、尸體化學研究尸體血液、腦脊液、玻璃體液(vitreoushumour,VH)以及其它體液中化學成分的死后變化。玻璃體液具有解剖位置相對隔離、不易受到污染和死后變化、腐敗緩慢等特點，是尸體化學研究的理想檢材。死亡時間推斷是法醫(yī)病理學研究的首要任務之一，VH成分死后變化與PMI關系也成為國內外法醫(yī)學研究的熱點。近年來，研究重點集中到提高推斷準確度上，包括取樣方法、成分選擇以及PMI推斷方程建立方法等。 本文重點探索VH微量取樣方法及

2、推斷方程置信區(qū)間的作用，分述如下： 第一部分微量取樣VH的方法研究 VH在尸體化學研究中占有重要位置。眼科生理學研究認為玻璃體內各部分物質含量不均一，即存在“濃度梯度”，Coe因此認為應一次取出所有VH以避免其影響樣本物質含量。隨著檢驗技術的提高，近年有學者提出了微量或部分取樣VH。還有學者觀察認為雙眼VH物質含量也不一致，或死后改變不同步。上述爭議影響了VH的取樣和研究方法，未見取樣方法專項研究報道。 本部分采

3、用動物實驗，初步探討樣本物質含量與眼內濃度梯度和雙眼濃度差的關系，比較微量取樣與一次取樣的差異，以及間隔取樣的可行性及對PMI研究的影響。在法醫(yī)學界首次研究了VH微量重復取樣和間隔微量取樣的可行性，為人體研究提供取樣方法準備。 實驗1VH鈣、鉀、鈉、氯、磷含量與濃度差的研究 目的研究VH樣本鈣、鉀、鈉、氯、磷含量與眼內“濃度梯度”的關系，以及雙眼VH樣本物質含量及其死后變化是否一致，研究重復微量取樣的可行性以及是否存在雙

4、眼濃度差異。 結論死后VH雙眼物質含量及死后變化一致；所謂玻璃液濃度梯度未顯著影響微量重復取樣樣本的物質含量，微量重復取樣樣本總體一致。 實驗2微量取樣與一次取樣VH的比較研究 目的比較微量取樣與一次取樣的差異，研究兩種取樣方法對樣本物質含量的影響。 結論一次取樣與微量取樣VH物質含量總體一致，但是取樣方法對樣本物質含量的離散度有影響。一次取樣樣本的變異程度和雙眼間濃度差的彌散程度較大；微量取樣的穩(wěn)定性、

5、可重復性較好，更適于VH死后研究。 實驗3間隔多次微量取樣玻璃體液研究 目的探索間隔多次微量取樣的可行性，以及對PMI研究的影響。 結論PMI96h內，間隔微量取樣未顯著影響VH鈣、鉀、鈉、氯離子和無機磷等物質含量的死后變化；間隔時間、雙眼交替微量取樣對鈣、鉀和鈉死后變化趨勢無影響，可以替代傳統(tǒng)一次取樣方法成為玻璃體液PMI研究的取樣方法之一。 第二部分VH成分死后變化及角膜上皮基底細胞核DNA含量變化與

6、PMI關系的研究 推斷死亡時間是VH研究的重要課題之一。迄今為止PMI推斷方程不一、推斷準確度不高。有學者提出對死因、年齡、溫度等進行控制、VH多成分研究建立多元推斷方程、以PMI為自變量建立推斷方程等以提高推斷準確度，部分國外學者還注意到了置信區(qū)間對總體推斷結果的影響。 本部分采用動物實驗，運用第一部分的研究成果，間隔微量取樣觀察了VH鉀、鈉、鎂、銨離子的死后變化；結合本系在檢測DNA含量推斷PMI研究領域的豐富經驗，

7、研究了排列規(guī)則、成分單一的角膜上皮基底細胞DNA含量相關7個參數的死后變化。從置信區(qū)間角度討論各參數PMI推斷價值，并在多指標、參數范圍探討多元擬合推斷方程的意義。這項研究為國內PMI推斷引入了評價新標準，為今后研究指標篩選和建立多元分析提供重要方法參考。 實驗4間隔取樣VH檢測鉀、鈉、鎂、銨含量推斷PMI研究 目的雙眼交替間隔取樣、觀察家兔VH鉀、鈉、鎂和銨等離子含量死后變化，結合置信區(qū)間評估各參數的PMI推斷價值。

8、 結論死后96h內，VH鉀、鈉、鎂、銨離子含量變化均與PMI相關，可建立推斷方程。推斷方程及其置信區(qū)間均與PMI推斷準確度有關，評價方程時應考慮推斷置信區(qū)間：鈉、鎂方程的95％置信區(qū)間為13h～15h，整體PMI價值偏低；鉀95％置信區(qū)間隨PMI逐步擴大，可能影響PMI72h以后的推測精度。綜合考慮，72hPMI內，鉀研究價值較高；而死后24h～96h內銨的研究價值較大。 實驗5角膜上皮基底細胞DNA含量以及VH鉀、鈉含量

9、與PMI關系的研究 目的運用圖像分析技術，研究家兔角膜上皮基底細胞DNA含量變化與PMI的關系；并結合實驗4觀察結果，探索多元PMI推斷方程對推斷準確度的影響。 結論死后120h內，家兔角膜上皮基底細胞DNA含量與死亡時間相關，其中A、IOD和AG建立的PMI推斷方程平均推斷偏差較小，具有較高研究價值。擬建多元方程應進行統(tǒng)計分析和置信區(qū)間測算；死后12h～96h，同時觀測VH鈉含量及角膜上皮基底細胞細胞核DNA平均灰度(