藥物性玻璃體液化及后脫離聯(lián)合高氧誘導(dǎo)晶狀體的氧化損傷.pdf

1、玻璃體凝膠對維持眼內(nèi)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性具有重要的作用。在年齡相關(guān)性玻璃體液化或玻璃體切除的人群中，由于玻璃體結(jié)構(gòu)的改變引起眼內(nèi)氧梯度發(fā)生變化，使晶狀體周圍氧分壓增高，可加速晶狀體核硬化和核性白內(nèi)障的發(fā)生。因此，本課題研究主要是通過藥物誘導(dǎo)玻璃體液化、玻璃體后脫離（PVD）聯(lián)合高氧處理的大鼠模型，觀察高氧通過玻璃體凝膠的改變對晶狀體氧化損傷的影響，研究玻璃體對晶狀體維持正常代謝的保護(hù)作用。
　　目的：
　　1.探討大鼠玻璃體腔注射纖

2、溶酶和透明質(zhì)酸酶誘導(dǎo)PVD的有效性和安全性，進(jìn)一步明確聯(lián)合應(yīng)用纖溶酶和透明質(zhì)酸酶的最佳組合濃度。
　　2.觀察藥物誘導(dǎo)大鼠玻璃體液化、PVD聯(lián)合高濃度氧吸入處理后晶狀體形態(tài)學(xué)的變化和相關(guān)生物化學(xué)指標(biāo)的改變，探究高氧對晶狀體的氧化損傷機(jī)制及玻璃體凝膠對晶狀體氧化損傷的保護(hù)作用。
　　方法：
　　1.雄性SD大鼠18只，體重200-220g，隨機(jī)分為A、B、C3組，每組6只，右眼均為實(shí)驗(yàn)眼：A組玻璃體腔內(nèi)注射0.15U纖溶

3、酶+5U透明質(zhì)酸酶，B組注射0.25U纖溶酶+5U透明質(zhì)酸酶，C組注射0.5U纖溶酶+5U透明質(zhì)酸酶，3組大鼠左眼玻璃體腔內(nèi)均注射眼用平衡鹽液10μL作為對照眼。注藥前后行裂隙燈和直接眼底鏡觀察眼部一般情況，7d后處死動(dòng)物并取眼球標(biāo)本做組織病理切片HE染色和掃描電子顯微鏡檢查，觀察視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)形態(tài)和玻璃體視網(wǎng)膜界面以判斷玻璃體液化和后脫離發(fā)生的情況。
　　2.根據(jù)第一步實(shí)驗(yàn)結(jié)果，將60只SD健康大鼠隨機(jī)分為4組：對照組（n=15

4、），玻璃體后脫離（PVD）組（n=15），高氧組（n=15），PVD+高氧組（n=15）。對照組和高氧組的右眼玻璃體腔注射眼用平衡鹽液（BSS）10μL；PVD組和PVD+高氧組的右眼玻璃體腔注射0.5U纖溶酶+5U透明質(zhì)酸酶誘導(dǎo)玻璃體液化和PVD。7d后，高氧組和PVD+高氧組暴露于高濃度氧環(huán)境，1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)大氣壓（atm），80％-85％氧濃度，3h/d，共5mo。用裂隙燈檢查大鼠晶狀體混濁度的變化，參考牛津大學(xué)眼科晶狀體混濁度的分級標(biāo)

5、準(zhǔn)。5mo后處死大鼠，每組取出4只晶狀體做HE染色和蛋白質(zhì)-谷胱甘肽二硫化物（protein-glutathione mixed disulfide，PSSG）免疫組化分析，其余11只晶狀體經(jīng)剝離分為晶狀體皮質(zhì)（包括囊膜）和核兩部分，分別測定谷胱甘肽（glutathione，GSH）、氧化型谷胱甘肽（oxidized glutathione，GSSG）、水溶性蛋白質(zhì)、抗壞血酸（維生素C）的含量以及過氧化氫酶（catalase，CAT）活

6、性。同時(shí)采集房水和玻璃體液，測定房水和玻璃體液中抗壞血酸的含量。
　　結(jié)果：
　　1.掃描電子顯微鏡檢查結(jié)果顯示，三組實(shí)驗(yàn)眼均有不同程度PVD的發(fā)生，A組出現(xiàn)部分性PVD為5/6，完全性PVD為1/6；B組出現(xiàn)部分性PVD為2/6，完全性PVD為4/6；C組均出現(xiàn)完全性PVD為6/6；對照眼均未見PVD發(fā)生。A、B、C3組實(shí)驗(yàn)眼出現(xiàn)完全性PVD的總發(fā)生率為61.1％（11/18）與三組的對照眼（0/18）相比，差異具有顯著性

7、（P<0.001）。C組實(shí)驗(yàn)眼出現(xiàn)完全性PVD的發(fā)生率為100％（6/6）與A組實(shí)驗(yàn)眼16.7％（1/6）相比，差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。各組實(shí)驗(yàn)眼裂隙燈檢查均未發(fā)現(xiàn)明顯眼內(nèi)炎性反應(yīng)。視網(wǎng)膜組織標(biāo)本行HE染色、光學(xué)顯微鏡檢查均未發(fā)現(xiàn)視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)的異常改變。因此，0.5U纖溶酶+5U透明質(zhì)酸酶誘導(dǎo)玻璃體液化和完全性PVD發(fā)生的效果最好，并且對眼內(nèi)組織無明顯毒性。
　　2.藥物誘導(dǎo)PVD聯(lián)合高濃度氧吸入處理5mo

8、后，與對照組相比，PVD組、高氧組和PVD+高氧組3組晶狀體均保持透明，組織形態(tài)學(xué)沒有明顯差別。此外，各組間的晶狀體重量也未見明顯差別（P>0.05）。
　　3.與對照組相比，PVD組晶狀體皮質(zhì)和核兩部分的水溶性蛋白質(zhì)、GSH、抗壞血酸含量和CAT活性均有不同程度地降低，GSSG含量增加，但均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。然而，高濃度氧吸入處理5mo后的高氧組與對照組相比，晶狀體核部的水溶性蛋白質(zhì)、GSH和抗壞血酸含量分別減少了8

9、.89％（P<0.05）、12.83％（P<0.05）和16.67％（P<0.05），晶狀體皮質(zhì)部3個(gè)指標(biāo)含量也均有降低，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。藥物玻璃體溶解術(shù)后給予高濃度氧吸入處理5mo后，PVD+高氧組晶狀體核部的水溶性蛋白質(zhì)、GSH和抗壞血酸的含量較對照組進(jìn)一步下降，分別降低了12.16％（P<0.01）、17.08％（P<0.01）和19.23％（P<0.05），晶狀體皮質(zhì)部的水溶性蛋白質(zhì)較對照含量下降了5.48％（P

10、<0.05）。此外，與對照組相比，高氧組和PVD+高氧組晶狀體皮質(zhì)部的CAT活性分別下降了26.66％（P<0.05）和30.99％（P<0.05），氧化產(chǎn)物GSSG含量分別增加了18.71％（P<0.05）和21.78％（P<0.05）。
　　4.與PVD組相比，高氧組晶狀體皮質(zhì)部和核部中的抗氧化物略有降低，但均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。然而，PVD+高氧組與PVD組相比，晶狀體核部的水溶性蛋白質(zhì)和GSH含量分別減少了8.5

11、8％（P<0.05）和11.08％（P<0.05）。PVD+高氧組與高氧組相比，晶狀體皮質(zhì)和核兩部分的水溶性蛋白質(zhì)、GSH、抗壞血酸的含量和CAT活性均有所降低，GSSG含量略有增加，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　5.與對照組相比，PVD組的玻璃液和房水中的抗壞血酸含量均略有降低，但是差別無顯著性（P>0.05）。高氧組與對照組相比，玻璃液和房水中抗壞血酸含量下降，分別為9.84％（P<0.05）和19.23％（P<

12、0.05）。藥物玻璃體溶解術(shù)后給予高濃度氧吸入處理5mo的PVD+高氧組玻璃液和房水中抗壞血酸含量較對照分別下降了13.98％（P<0.01）和21.47％（P<0.05）。此外，PVD+高氧組與PVD組相比，玻璃液中的抗壞血酸含量降低了10.63％（P<0.05），而房水中的抗壞血酸含量雖有所降低，但差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；高氧組與PVD組相比，PVD+高氧組與高氧組相比，玻璃液和房水中的抗壞血酸含量均有所降低，但差別沒有

13、顯著性（P>0.05）。
　　6.Westernblot表明，高氧組和PVD+高氧組晶狀體PSSG的表達(dá)高于PVD組和對照組，但是兩組的PSSG的表達(dá)未見顯著性差異（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.0.5U纖溶酶聯(lián)合5U透明質(zhì)酸酶誘導(dǎo)大鼠玻璃體液化和完全性PVD的效果最好，并且對眼內(nèi)組織無明顯的毒性。
　　2.高氧能夠誘導(dǎo)大鼠晶狀體抗氧化物含量下降，包括玻璃體液、房水中抗壞血酸含量降低。藥物性玻璃體液化形成