黃芩苷和蝦青素對中國對蝦非特異性免疫特性影響的研究.pdf

1、本論文通過養(yǎng)殖試驗和細(xì)菌攻毒試驗分析了兩種植物提取物黃芩苷和蝦青素對中國對蝦非特異性免疫酶及其免疫相關(guān)基因影響的研究。研究分為三部分：
　　 第一部分：黃芩苷對中國對蝦非特異性免疫特性的影響
　　 本實驗?zāi)康氖茄芯坎煌瑵舛鹊狞S芩苷對中國對蝦體內(nèi)免疫相關(guān)酶活性的影響。用含不同濃度梯度(0g·kg-1、50mg·kg-1、100mg·kg-1和150mg·kg-1)黃芩苷的飼料連續(xù)投喂健康的中國對蝦(Fenneropenae

2、uschinensis)，于給藥第1，3，5，7，9，11d采集實驗對蝦的血淋巴、肝胰腺、肌肉組織，測定不同組織的酸性磷酸酶(ACP)、過氧化氫酶(CAT)、一氧化氮合酶(INOS)、溶菌酶(LSZ)、超氧化物歧化酶(SOD)活性的變化，研究黃芩苷對中國對蝦非特異性免疫酶活指標(biāo)和解毒代謝能力的影響。實驗結(jié)果表明，中、高濃度處理紐血淋巴、肝胰腺、肌肉組織的ACP、INOS、SOD在第3d后呈上升趨勢，分別達(dá)到峰值后趨于穩(wěn)定狀態(tài)，亦比同期對

3、照組差異顯著(P<0.05)：低濃度黃芩苷處理組各種酶活性比同期對照組差異不顯著(P>0.05)，而低、中、高濃度處理組血淋巴LSZ酶活性比同期對照組差異極顯著(P<0.01)。各種酶活亦存在組織差異性，其中ACP、CAT活性肝胰腺中活性最高，肌肉和血淋巴次之；而INOS、LSZ、SOD活性，血淋巴中最高，肌肉和肝胰腺次之。同時攻毒試驗表明，黃芩苷能有效地降低試驗組中國對蝦的死亡率，提高免疫保護率，其中中濃度處理組的保護效果為最佳。因此

4、，在飼料中添加黃芩苷能顯著提高中國對蝦的免疫相關(guān)酶活，增強非特異性免疫功能及降低中國對蝦對病原的敏感性，增強機體抗病力，同時其研究結(jié)果也為黃芩苷在對蝦養(yǎng)殖過程的應(yīng)用提供了一定的理論依據(jù)。
　　 第二部分黃芩苷對中國對蝦toll樣受體基因的表達(dá)影響及抗鰻弧菌感染的研究
　　 本實驗?zāi)康氖茄芯坎煌瑵舛鹊狞S芩苷對中國對蝦體內(nèi)免疫相關(guān)基因的影響。用熒光定量的方法檢測投喂不同濃度的黃芩苷(0g·kg-1、50mg·kg-1、100

5、mg·kg-1和150mg·kg-1)后，于給藥第1，3，5，7，9，11d后采集實驗對蝦肌肉、血淋巴和肝胰腺toll樣受體mRNA表達(dá)量，以及用濃度為108cell/ml的鰻弧菌進行攻毒，注射劑量50ul/尾，并放養(yǎng)在200L的聚乙烯桶中，于0、12、24、48、72及96h統(tǒng)計死亡率和免疫保護率。研究結(jié)果表明：三個濃度組黃芩苷對中國對蝦肌肉、血淋巴和肝胰腺toll樣受體mRNA表達(dá)量有顯著的抑制作用。黃芩苷有可能是抑制NF-KB的活

6、性可阻斷炎癥的關(guān)鍵啟動步驟及其次級炎癥反應(yīng)，由此可以大膽推測出黃芩苷能夠通過NF-KB途徑間接的抑制TLR基因mRNA的表達(dá)量，從而抑制先天免疫系統(tǒng)產(chǎn)生炎癥因子，相對提高了吞噬細(xì)胞的吞噬能力，增強天然免疫細(xì)胞的殺傷能力。同時攻毒試驗表明，黃芩苷能有效地降低試驗組中國對蝦的死亡率，提高免疫保護率，其中中濃度處理組的保護效果為最佳。
　　 第三部分：蝦青素和裂壺藻對中國對蝦非特異性免疫特性的研究，在基礎(chǔ)口糧中分別添加A組50mg/k

7、g蝦青素、B組100mg/kg、C組150mg/kg、D組50mg/kg蝦青素+10‰裂壺藻、E組100mg/kg蝦青素+10‰裂壺藻、F組150mg/kg蝦青素+10‰裂壺藻，空白組A，空白組B，于給藥第1，5，10，15，20，25d采集實驗對蝦的血淋巴、肝胰腺、肌肉和鰓組織非特異性酶活的變化情況，結(jié)果表明：
　　 (1)與對照組相比，中國對蝦血清、肌肉和鰓組織蛋白含量均顯著增加，而肝胰腺蛋白含量變化不大；在含有裂壺藻的低、

8、中、高三個濃度組中，高濃度組蛋白含量高于同期其他各組。
　　 (2)蝦青素和裂壺藻對中國對蝦血清SOD活力影響具有顯著的劑最效應(yīng)，單獨投喂蝦青素高濃度組血清顯著高于對照組，混合投喂蝦青素和裂壺藻組SOD活力在第25d顯著高于同期單獨投喂蝦青素各組。無論是單獨投喂蝦青素處理組還是混合投喂的各個濃度組肝胰腺和肌肉SOD活力均呈現(xiàn)顯著上升的趨勢，并且其影響具有顯著的劑量效應(yīng)?；旌贤段菇MF對SOD活力影響最為顯著。蝦青素和裂壺藻對中國對

9、蝦鰓的T-SOD活力影響不大，只是在混合投喂組D在第5d出現(xiàn)峰值
　　 (3)單獨投喂蝦青素和混合投喂的各濃度組，血清、肝胰腺、肌肉CAT酶活力均高于同期的對照組，均有促進作用。其中混合投喂的各個濃度組血清CAT酶活力比單獨投喂蝦青素的處理組對蝦血淋巴CAT首每活力差異性顯著(P<0.05)，混合投喂E組在第10d有峰值?；旌贤段笷組肝胰腺CAT活力在第20d有峰值，并且是同期單獨投喂蝦青素C組CAT酶活的27倍?；旌贤段菇MD組

10、、F組對肌肉CAT酶活力呈現(xiàn)促進作用，且蝦青素濃度越高促進作用越明顯，呈現(xiàn)明顯的劑量效應(yīng)?；旌贤段菇M和單獨投喂組對中國對蝦鰓CAT活力整體呈現(xiàn)促進作用，但是差異不顯著。
　　 (4)不同濃度組對中國對蝦血清MDA表現(xiàn)出不同的抑制作用。單獨投喂蝦青素組整體呈現(xiàn)出對中國對蝦血清MDA活力先上升后下降的的趨勢，而混合投喂蝦青素和裂壺藻組血清MDA活力一直下降的趨勢。其下降趨勢不呈現(xiàn)一定的劑量關(guān)系，并且投喂蝦青素和裂壺藻個濃度組沒有明顯