構(gòu)建細(xì)粒棘球蚴熒光小鼠模型的方法學(xué)研究.pdf

1、目的：
　　1.嘗試細(xì)粒棘球蚴體外熒光染色，通過紅綠熒光信號強(qiáng)度分析不同藥物對原頭蚴活性的影響。
　　2.構(gòu)建細(xì)粒棘球蚴小鼠活體內(nèi)熒光發(fā)光模型，并對小鼠肝臟中的細(xì)粒棘球蚴感染灶進(jìn)行定位及量化分析。探討構(gòu)建小鼠活體內(nèi)生物發(fā)光模型的可能性。
　　方法：
　　1.無菌分離提取原頭蚴，將原頭蚴分為對照組、二甲雙胍處理組（將10 mM二甲雙胍加入原頭蚴培養(yǎng)基中）、聯(lián)合用藥處理組（將10 mM二甲雙胍以及15μM阿苯達(dá)唑(相

2、當(dāng)于4.2μg/mL)聯(lián)合加入原頭蚴培養(yǎng)基中）。培養(yǎng)并動態(tài)監(jiān)測原頭蚴活性。
　　2.采用JC-1熒光染料對不同處理組原頭蚴進(jìn)行熒光染色，并置于共聚焦熒光顯微鏡下采集成像并記錄分析各組原頭蚴熒光強(qiáng)度。
　　3.將不同處理組的原頭蚴置于24孔板中，連續(xù)培養(yǎng)并采用小動物發(fā)光成像儀對三組原頭蚴熒光強(qiáng)度進(jìn)行動態(tài)監(jiān)測，直至熒光信號消失。
　　4.將不同處理組的原頭蚴染色后種植于CF-1雄性小鼠肝臟被膜下，將不同注射組的小鼠置于小動

3、物發(fā)光成像儀中進(jìn)行動態(tài)成像分析。選取對照組小鼠進(jìn)行熒光梯度實(shí)驗(yàn)，分析熒光信號衰減趨勢。
　　結(jié)果：
　　1.與對照組相比，Met藥物處理組原頭蚴活性出現(xiàn)一定程度的下降，ABZSO和Met藥物聯(lián)合使用組原頭蚴活性下降最為顯著。
　　2.對照組原頭蚴的紅色熒光強(qiáng)度明顯強(qiáng)于綠色熒光；Met藥物處理組原頭蚴紅色熒光強(qiáng)度與綠色熒光沒有顯著差異；ABZSO和Met藥物聯(lián)合使用組原頭蚴綠色熒光強(qiáng)度明顯強(qiáng)于紅色熒光。
　　3.三

4、組中原頭蚴的紅色熒光出現(xiàn)了明顯的下降趨勢，聯(lián)合用藥組的下降趨勢最為明顯，其次是二甲雙胍藥物處理組，對照組的下降趨勢較為平緩。而綠色熒光在聯(lián)合用藥組與二甲雙胍處理組中出現(xiàn)了明顯的增強(qiáng)趨勢，且聯(lián)合用藥組強(qiáng)于二甲雙胍組,隨后相應(yīng)出現(xiàn)下降的趨勢。對照組的綠色熒光從檢測開始就處于較低水平，且有一定的下降趨勢，實(shí)驗(yàn)組與對照組相比具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。
　　4.成功種植進(jìn)小鼠肝臟后，對照組的紅色熒光區(qū)域明顯大于綠色熒光，且紅色熒

5、光強(qiáng)度強(qiáng)于綠色熒光,紅/綠熒光的強(qiáng)度比為4.1。二甲雙胍組的紅色熒光信號與綠色熒光相比，無論是熒光區(qū)域的大小還是熒光強(qiáng)度都沒有明顯的差異,且紅/綠比值為1.2。聯(lián)合用藥組的紅色熒光區(qū)域要小于綠色熒光，且紅色熒光強(qiáng)度也弱于綠色熒光，紅/綠比值為0.5。對照組小鼠肝區(qū)的紅色熒光在觀察初期強(qiáng)度較高，隨后逐漸的減弱。綠色熒光在種植后出現(xiàn)一定范圍內(nèi)的上升趨勢，隨后逐漸消褪。紅、綠熒光在36h檢測后，信號完全消失。
　　結(jié)論：
　　我們