南方根結線蟲flp-16、flp-27、flp-31基因的克隆及其表達原位雜交分析.pdf

1、類似FMRF酰胺多肽(FMRFamide-likepeptide，F(xiàn)LP)在線蟲中廣泛存在，對調(diào)節(jié)線蟲運動、取食、感知環(huán)境、建立寄生行為具有重要作用，深入研究植物寄生線蟲FLF的功能對線蟲防治具有重要意義。本研究以南方根結線蟲(Meloidogyneincognita)2齡幼蟲為研究材料，利用cDNA末端快速擴增(RACE)的方法，克隆了南方根結線蟲(Meloidogyneincognita)FLP基因Mi-flp-16，Mi-flp-

2、27和Mi-flp-31，并利用原位雜交技術進行基因定位，為探討flp基因的功能及其應用奠定了基礎。主要研究結果如下： 1.克隆目的基因：利用生物信息學篩選靶標基因的EST序列，以南方根結線蟲2齡幼蟲為研究對象，利用RACE法克隆了目的基因cDNA全長序列，并進行分析。3個基因全長分別為690bp、429bp、358bP,開放閱讀框分別為522bp、279bp、267bp。Mi-flp-16編碼174個氨基酸的蛋白，預測蛋白分子

3、量大約是20.7KDa，等電點9.45，GenBank登錄號為EU549831；Mi-flp-27編碼93個氨基酸的蛋白，預測蛋白分子量大約是10.5KDa，等電點9.80，GenBank登錄號為AW871675；Mi-flp-31編碼89個氨基酸的蛋白，預測蛋白分子量大約是10.3KDa，等電點9.51，GenBank登錄號為BM882182。3個flp基因編碼了5個FLPs，分別為Mi-FLP-16(x2AQTFVRF,GQTFVR

4、F),Mi-FLP-27(AKGSRMRF)，Mi-FLP-31(LYRPRGPPRF)。這三個基因都是在植物寄生線蟲中第一報道全長序列，并且基因Mi-flp-31，是在整個線蟲門中第一次報道的全長序列。 2.原位雜交確定基因表達位置：根據(jù)目的基因設計特異探針，利用原位雜交確定基因表達位置。結果顯示3個基因表達位點均在線蟲的圍喉神經(jīng)環(huán)處。圍喉神經(jīng)環(huán)是線蟲的神經(jīng)中樞，基因表達在此處，說明這3個基因與線蟲的神經(jīng)系統(tǒng)有著密切的關系。確