細粒棘球蚴感染早期Th9細胞的分布及其因子的表達.pdf

1、目的：
　　通過體外細粒棘球蚴原頭蚴與小鼠脾細胞共培養(yǎng)，以及建立細粒棘球蚴感染小鼠模型的方法，檢測原頭蚴是否可以誘導(dǎo)脾臟淋巴細胞Th1細胞、Th2細胞、Treg細胞、Th9細胞的分化以及相關(guān)炎性細胞因子的表達，探討Th細胞子集是否參與細粒棘球蚴的免疫逃逸，以及不同細胞因子的相互作用可能會導(dǎo)致原頭蚴可以逃避宿主的免疫應(yīng)答作用。
　　方法：
　　1、體外實驗
　　取BALB/c小鼠脾細胞制備成脾細胞懸液，原頭蚴與小鼠

2、脾細胞懸液共培養(yǎng)12 h、24 h、36 h、48 h后，流式細胞分析儀檢測脾細胞中Th1細胞、Th2細胞、Treg細胞和Th9細胞的數(shù)量；加入IL-9共培養(yǎng)48 h后Real-time PCR測定脾細胞IL-9Rα、RORα、IL-4Rα、IL-13Rα2、IL-5RαmRNA的表達；ELISA檢測上清液中IL-9、IL-10、IL-4、IFN-γ、TGF-β、IL-25的表達。
　　2、體內(nèi)試驗
　　建立小鼠細粒棘球蚴感

3、染模型，BALB/c小鼠隨機分組，實驗組腹腔接種原頭蚴，對照組腹腔接種PBS；分別于第1、5、9天處死小鼠，收集血清、制備脾細胞懸液。流式細胞分析儀檢測脾細胞中Th1細胞、Th2細胞、Treg細胞和Th9細胞的數(shù)量；ELISA檢測血清IL-9、IL-10、IL-4、IFN-γ、TGF-β、IL-25的表達。
　　結(jié)果：
　　1、體外實驗
　　建立體外脾細胞與原頭蚴共培養(yǎng)模型，脾細胞和原頭蚴共培養(yǎng)后Th1細胞在各時間點無

4、統(tǒng)計學(xué)差異；在共培養(yǎng)24 h、36 h、48 h后，脾細胞中Th2細胞、Treg細胞含量增加，有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05)；脾細胞與原頭蚴共培養(yǎng)36 h、48 h后，脾細胞中Th9細胞含量增加，有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05)。共培養(yǎng)12 h、24 h、48 h時，上清中IL-9表達增加，有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05)；其IL-10、IL-4、TGF-β逐漸升高，在共培養(yǎng)12 h-48 h后升高有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05)；IFN-γ先增加后

5、減少有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05)；IL-25在共培養(yǎng)24 h時增加有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05)。加入IL-9共培養(yǎng)48 h后，IL-9Rα、RORα、IL-4Rα、IL-13Rα2的mRNA表達增加有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05)。
　　2、體內(nèi)實驗
　　建立小鼠細粒棘球蚴原頭蚴感染模型。脾細胞中Th1細胞的含量在感染后9天升高（P<0.05)；脾細胞中Th9細胞、Th2細胞、Treg細胞的含量在感染后5、9天升高（P<0.05

6、)；IL-9、IFN-γ在感染后第5、9天表達升高（P<0.05)；IL-10、PU.1、TGF-β和IL-25在感染后第1、5、9天表達升高（P<0.05)；IL-4在感染后第1、5天表達升高（P<0.05)；蛋白水平與mRNA水平基本一致。
　　結(jié)論：
　　原頭蚴能刺激小鼠脾細胞向Th1細胞、Th2細胞、Treg細胞和Th9細胞分化且上調(diào)相應(yīng)細胞因子的分泌，這些細胞類型和細胞因子可能相互作用從而影響宿主的免疫應(yīng)答，進而提