真皮間充質(zhì)干細胞和心臟間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)及生物學(xué)特性研究.pdf

1、畜禽種質(zhì)資源是維持生態(tài)安全、農(nóng)業(yè)穩(wěn)定的重要資源，它推動著經(jīng)濟的繁榮與社會的進步。重要的家養(yǎng)動物種質(zhì)資源應(yīng)該受到重視，并得到有效的保護。間充質(zhì)干細胞可以在體外快速增殖并且可以向其他細胞分化。這些優(yōu)點使得它們成為畜禽種質(zhì)資源保存研究的新渠道。本實驗以肉雞真皮來源和鵝心臟來源的間充質(zhì)干細胞為實驗對象，在體外對細胞進行了分離培養(yǎng)、生物學(xué)特性研究和誘導(dǎo)分化研究，并得到以下結(jié)果:
　　1.利用膠原酶Ⅰ和胰蛋白酶分離得到肉雞真皮間充質(zhì)干細胞(D

2、ermal Mesenchymal Stem Cells，DMSCs),并在體外條件下培養(yǎng)31代，細胞形態(tài)主要為長梭形。RT-PCR鑒定結(jié)果顯示，細胞表達CD73、CD29、CD44，和CD71基因。免疫組織化學(xué)方法檢測結(jié)果顯示肉雞DMSCs陽性表達CD105、CD90、CD73和CD44表面標記物。通過流式細胞儀分析，CD29、CD44和CD73在肉雞DMSCs中高表達。DMSCs的生長曲線為明顯的“S”形，與細胞在體外增殖的通常規(guī)律

3、基本吻合。DMSCs的群體倍增時間和克隆形成能力的結(jié)果表明細胞的增殖能力隨著代次的升高而減弱。研究表明肉雞DMSCs能夠在一定的條件下被分化為成骨細胞、軟骨細胞和脂肪細胞，通過特異性染色和RT-PCR鑒定證明肉雞DMSCs向這三種細胞成功分化。
　　2.利用膠原酶Ⅱ和胰蛋白酶分離得到鵝心臟間充質(zhì)干細胞(Heart-derived Mesenchymal Stem Cells，HMSCs)，并在體外培養(yǎng)21代，細胞形態(tài)特征呈現(xiàn)梭狀。

4、RT-PCR和免疫組化檢測檢測結(jié)果都顯示細胞表達CD29，CD34，CD73，CD166和CD44等MSCs特異基因。通過流式細胞術(shù)分析，CD29，CD34，CD73，CD166和CD44在鵝HMSCs中高表達。HMSCs的生長曲線表明HMSCs經(jīng)過短暫潛伏期，進入迅速增殖的對數(shù)期，而后進入穩(wěn)定期和衰亡期，呈現(xiàn)出明顯的“S”形，與細胞體外生長的基本規(guī)律吻合。群體倍增時間結(jié)果表明HMSCs的增殖能力隨著代次的升高逐漸減弱。通過在培養(yǎng)基中加

5、入適當?shù)恼T導(dǎo)因子對HMSCs進行體外誘導(dǎo)分化實驗，通過特異性染色和RT-PCR等方法對實驗結(jié)果進行檢測。實驗結(jié)果表明，HMSCs成功被分化為成骨細胞、脂肪細胞和軟骨細胞，說明鵝HMSCs可以向多個方向誘導(dǎo)。
　　綜上所述，本實驗成功分離培養(yǎng)了肉雞DMSCs和鵝HMSCs，并且對它們進行了生物學(xué)特性研究和誘導(dǎo)分化研究。結(jié)果顯示，肉雞DMSCs和鵝HMSCs均表現(xiàn)出MSCs特有的生物學(xué)特性。實驗結(jié)果對畜禽種質(zhì)資源保存具有重要的意義，并