功能高分子納米微球的制備及在生物醫(yī)藥方面的應(yīng)用.pdf

1、目的：制備聚甲基丙烯酸縮水甘油酯（PGMA）材質(zhì)的有機(jī)高分子微球，研究不同的反應(yīng)溫度、轉(zhuǎn)速、單體和引發(fā)劑濃度、乳化劑用量、交聯(lián)劑用量對 PGMA粒徑、粒度分布系數(shù)（PDI）以及穩(wěn)定性的影響規(guī)律；研究 PGMA微球與毛細(xì)管內(nèi)壁的化學(xué)鍵合方法，制備PGMA納米粒子（PGMA NPs）涂層毛細(xì)管柱，以提高毛細(xì)管內(nèi)壁比表面積，研究制備的新型納米顆粒涂層毛細(xì)管柱的開管毛細(xì)管電色譜（OTCEC）分離性能。
　　探索制備羧化的磁性納米微球（MN

2、Ps）的新方法，并采用點擊化學(xué)的抗體定向固定化方法對其表面進(jìn)行修飾，制備免疫磁性微球。考察免疫磁性微球?qū)в邢鄳?yīng)抗原的腫瘤細(xì)胞的磁分離性能，以期開發(fā)出新型的腫瘤靶向免疫制劑。研究了合成和純化對疊氮苯甲酰肼的方法，并將其作為交聯(lián)劑用于抗體定向固定化中。
　　方法：采用乳液聚合法，以過硫酸鉀（KPS）為引發(fā)劑，十二烷基硫酸鈉（SDS）為乳化劑，二甲基丙烯酸乙二醇酯（EDMA）為交聯(lián)劑，甲基丙烯酸縮水甘油酯（GMA）為聚合單體制備PGM

3、A高分子微球。通過系列地改變條件，在不同的溫度、轉(zhuǎn)速及引發(fā)劑濃度等條件下進(jìn)行聚合反應(yīng)。然后用粒度分析儀測定所得微球的粒徑及粒度分布系數(shù)（PDI），用掃描電子顯微鏡（SEM）觀察微球形貌，考察聚合體系的成球性能以及各種因素對微球粒徑的影響規(guī)律。利用PGMA微球表面的環(huán)氧基與氨基修飾的毛細(xì)管內(nèi)表面之間的開環(huán)反應(yīng)，將PGMA微球固定到毛細(xì)管內(nèi)壁上。用 SEM觀測納米粒子涂覆在毛細(xì)管內(nèi)壁的情況。隨后，PGMA NPs涂層柱用賴氨酸活化，用于氨基

4、酸混合物的分離?？疾炝酥频玫募{米顆粒涂層管柱的批內(nèi)、批間分離結(jié)果重現(xiàn)性，并將結(jié)果與賴氨酸直接修飾的毛細(xì)管柱取得的相應(yīng)結(jié)果進(jìn)行比較。
　　以溶劑熱法制備單分散的羧化的MNPs，考察了反應(yīng)溫度，反應(yīng)時間，丙烯酸鈉/醋酸鈉等對成球的影響，得到了最佳反應(yīng)條件。用紅外分析光譜（IR）和透射電子顯微鏡（TEM）以及X射線衍射（XRD）對其性能和結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征。采用點擊化學(xué)的方法將抗體定向固定化于MNPs的表面，將其應(yīng)用于腫瘤細(xì)胞磁分離的實驗中，

5、并將分離結(jié)果與采用非定向抗體固定化方法修飾的MNPs的細(xì)胞磁分離結(jié)果進(jìn)行了比較。以對疊氮苯甲酸和水合肼為原料合成對疊氮苯甲酰肼，考察純化條件。采用IR和核磁共振光譜（NMR）對合成純化產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。
　　結(jié)果：本實驗使用乳液聚合法制備了PGMA微球，通過優(yōu)化制備條件，可以實現(xiàn)對微球粒徑的調(diào)控。通過SEM觀察可知，所制得的微球具有良好的球形度和單分散性。開發(fā)了納米微球涂層毛細(xì)管柱，即把納米微球作為OTCEC的固定相。通過電滲流（

6、EOF）的觀測及SEM結(jié)果比較，說明PGMA NPs涂層毛細(xì)管柱已成功制備。采用賴氨酸（Lys）作為色譜配基對制備的的毛細(xì)管柱進(jìn)行表面修飾制得PGMA/Lys NPs涂層管柱，使用該管柱成功的實現(xiàn)了對氨基酸混合物的毛細(xì)管電色譜（CEC）分離，分離結(jié)果重現(xiàn)性較好。
　　探明了基于溶劑熱法制備羧化的MNPs的最佳條件，首次提出來基于點擊化學(xué)的抗體定向固定化方法，經(jīng)IR測定得知抗體成功的固定化到MNPs表面，通過對比抗體定向固定化與非定

7、向固定化的磁性微球腫瘤細(xì)胞去除率，初步說明定向固定化抗體的方法優(yōu)于非定向固定化抗體的方法。本實驗合成出對疊氮苯甲酰肼，并得到最優(yōu)純化條件。
　　結(jié)論：采用乳液聚合法成功的制備了PGMA納米微球，粒徑在70 nm至200 nm范圍內(nèi)可控，制得微球呈明顯單分散性且粒度分布均勻。成功的將PGMA納米微球固定到毛細(xì)管內(nèi)壁上將其用于OTCEC的固定相。通過與單層配基修飾的管柱相比，PGMA NPs涂層的毛細(xì)管柱管柱可以提供更大的色譜保留和較