雙交聯(lián)劑體系氨基?；附宦?lián)聚集體的制備和研究.pdf

1、本文采用酶交聯(lián)聚集技術，以戊二醛和乙二醇二縮水甘油醚混合共同作為交聯(lián)劑，制備了氨基酰化酶（E.C.3.5.1.14）交聯(lián)聚聚集體，探索了雙交聯(lián)劑體系制備交聯(lián)聚集體的可行性并優(yōu)化了反應制備工藝條件。得到如下結果：
　　（1）采用乙醇、丙酮和乙二醇二甲醚三種有機溶劑作為沉淀劑沉降游離態(tài)的酶，乙醇的沉淀作用最好。當乙醇用量為90％V/V時，酶蛋白幾乎全部被沉淀下來，酶活保留率為82%。丙酮和乙二醇二甲醚隨也有著較好的沉淀效果，但在沉淀過

2、程中容易奪取酶分子表面的結合水，從而導致酶活性保留率的下降。
　?。?）氨基酰化酶缺乏表面胺基，無法與戊二醛有效的交聯(lián)。乙二醇二縮水甘油醚（EGDE）是一種較為新穎的環(huán)氧型交聯(lián)劑，交聯(lián)機理與戊二醛不同，其環(huán)氧基團可以和胺基、巰基、羥基等多種基團反應。通過將戊二醛和乙二醇二縮水甘油醚混合共同作為交聯(lián)劑使用，提高了氨基?；傅慕宦?lián)效率。當酶與戊二醛和乙二醇二縮水甘油醚的質量比為1:0.75:2，在30℃下反應12個小時后，制備生成的氨

3、基?；附宦?lián)聚集體有63.42%的酶活保留率。
　　（3）采用固定化技術，氨基?；傅牟僮鞣€(wěn)定性得到明顯提高。大量的酶分子團聚交聯(lián)在一起，使固定化酶的整體結構比較穩(wěn)定，熱穩(wěn)定性和耐熱耐酸性能方面，固定化酶要明顯好于自由酶。由于底物要克服更大的傳質阻力才能到達酶顆粒的活性核心，固定化酶最適溫度比自由酶高10℃。固定化酶的最適pH為8.0，自由酶為7.0。
　　（4）固定化酶在重復水解5次后還保留著90%的初始酶活性，重復使用1