交聯(lián)脂肪酶聚集體(CLEAs)的制備及其粒徑影響因素研究.pdf

1、作為一類新型的無載體固定化酶，交聯(lián)酶聚集體以其制備方法簡(jiǎn)單、單位體積酶活高以及穩(wěn)定性好等受到廣泛的關(guān)注。目前對(duì)交聯(lián)酶聚集體的研究主要集中在制備及其性能考察方面，但對(duì)交聯(lián)酶聚集體粒徑的調(diào)控及其對(duì)CLEAs性能的影響關(guān)注很少。然而，CLEAs的粒徑大小不僅影響傳質(zhì)效率，還關(guān)系到CLEAs的穩(wěn)定性，因此，粒徑調(diào)控對(duì)CLEAs研究和應(yīng)用來說至關(guān)重要。鑒此，本研究以假絲酵母脂肪酶（Candidasp.1619）為對(duì)象，探索并優(yōu)化了其交聯(lián)酶聚集體的

2、制備條件，在此基礎(chǔ)上通過不同調(diào)控手段得到了不同粒徑的CLEAs，并研究了不同粒徑CLEAs在性能方面的差異。主要研究結(jié)果如下:
　　 (1)利用無載體固定化酶技術(shù)，以三倍酶液體積的丙酮為沉淀劑，2.08％的戊二醛為交聯(lián)劑，在交聯(lián)時(shí)間為120min、交聯(lián)溫度20℃、離心轉(zhuǎn)速為4000r·min-1時(shí)能得到活性和穩(wěn)定性均較游離酶理想的CLEAs。
　　 (2)利用表面活性劑Tween-20和牛血清蛋白BSA對(duì)CLEAs進(jìn)行改

3、性，其活性分別提高了7％和22％。酶學(xué)性能分析顯示，CLEAs最適pH值范圍為6.0～9.0，在50℃下熱處理2h能保留60％以上的活性，與游離酶相比穩(wěn)定性得到了顯著提高。對(duì)比CLEAs和游離酶的Km和Vmax分析發(fā)現(xiàn)，CLEAs對(duì)底物的親和力較游離酶要弱，但單位時(shí)間內(nèi)的催化效果要優(yōu)于游離酶。
　　 (3)對(duì)影響CLEAs粒徑因素分析表明，交聯(lián)過程是決定粒徑大小的關(guān)鍵步驟。在交聯(lián)過程加入超聲方式可使CLEAs粒徑明顯減小，但顆粒