消銀解毒飲治療尋常型銀屑病的細(xì)胞生物學(xué)研究.pdf

1、銀屑病是一種以紅斑、鱗屑為主要表現(xiàn)的慢性炎癥性皮膚病，在我國和全世界都是常見病、多發(fā)病。當(dāng)前銀屑病的病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全得以闡明，治療仍然存在療效不滿意和易于復(fù)發(fā)的問題?，F(xiàn)代研究表明，銀屑病的基本病理表現(xiàn)為表皮角質(zhì)形成細(xì)胞的過度增生和分化不全，以及真皮毛細(xì)血管的增生。我院內(nèi)制劑——消銀解毒飲在我科臨床應(yīng)用二十余年，取得了良好的療效。我科近期完成國家中醫(yī)藥管理局重點(diǎn)科研課題臨床研究顯示，其治療銀屑病的總有效率為91.8％，顯著優(yōu)于復(fù)方青

2、黛膠囊對照組；用藥治療4周后，患者鱗屑中IL-8含量較治療前明顯下降。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，其對SEB誘導(dǎo)的小鼠血清IL-8的升高有拮抗作用，具有顯著的免疫調(diào)節(jié)功能。為探討消銀解毒飲除通過免疫調(diào)節(jié)而發(fā)揮其治療作用外，是否尚具有對角質(zhì)形成細(xì)胞的直接作用；對真皮血管內(nèi)皮細(xì)胞有何影響；以及消銀解毒飲中涼血、解毒、祛風(fēng)除濕等三組主要成分在治療銀屑病時(shí)所起的作用。我們運(yùn)用藥理血清的研究方法，以角質(zhì)形成細(xì)胞株COLO-16和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株ECV-

3、304為研究對象，用四唑鹽(MTT)比色法觀察消銀解毒飲及拆方后各組藥物血清對其增殖的影響；用流式細(xì)胞技術(shù)觀察藥物對其凋亡的影響；用雙抗體夾心ABC-ELISA法測定藥物對角質(zhì)形成細(xì)胞分泌VEGF的影響。通過細(xì)胞生物學(xué)方面的研究，進(jìn)一步探討了消銀解毒飲治療銀屑病的作用機(jī)制和作用靶位。并為中醫(yī)辨證組方規(guī)律的研究以及銀屑病的臨床治療提供新的思路和方法。 結(jié)果顯示：①M(fèi)TX組較蒸餾水組細(xì)胞存活率明顯降低，隨著濃度的升高差異亦加大，在濃

4、度高于10％時(shí)二者有極其顯著性差異(P<0.001)。消銀解毒飲組和涼血方組體外培養(yǎng)角質(zhì)形成細(xì)胞COLO-16的存活率明顯降低，且細(xì)胞的存活率與含藥血清濃度呈負(fù)相關(guān)，濃度越高存活率越低。消銀解毒飲組在濃度為5％、10％時(shí)較蒸餾水組有顯著性差異(P<0.05)，當(dāng)濃度升高到20％時(shí)有極其顯著性差異(P<0.001)。涼血方組在濃度為10％時(shí)較蒸餾水組有顯著性差異(P<0.05)，當(dāng)濃度升高到20％時(shí)有極其顯著性差異(P<0．001)。而解

5、毒方組和祛風(fēng)除濕方組隨著含藥血清濃度的升高體外培養(yǎng)角質(zhì)形成細(xì)胞COLO-16的存活率有所降低，但各個(gè)濃度組與蒸餾水相比無顯著性差異(P>0.05)。②在含藥血清濃度為20％時(shí)，解毒方組、祛風(fēng)除濕方組、涼血方組等三組細(xì)胞的凋亡率與蒸餾水組比較無顯著性差別(P<0.05)；而消銀解毒飲組、MTX組凋亡率顯著增高，與蒸餾水組相比有極為顯著性差異(P<0.001)。③在5％濃度下，MTX組、消銀解毒飲組和涼血方組體外培養(yǎng)血管內(nèi)皮細(xì)胞的存活率均有

6、所降低，但只有MTX組與對照組比較有較為顯著的差別(P<0.05)。在10％濃度下，消銀解毒飲組、涼血方組及MTX組血管內(nèi)皮細(xì)胞的存活率均有所下降，其中消銀解毒飲組和MTX組細(xì)胞存活率下降的較為明顯，與對照組比較有極其顯著性差異(P<0.001)，涼血方組與對照組比較亦有較為顯著的差別(P<0.05)。在20％濃度下，消銀解毒飲組、祛風(fēng)除濕方組、涼血方組以及MTX組血管內(nèi)皮細(xì)胞的存活率均有下降，其中消銀解毒飲組、涼血方組及MTX組與對照

7、組比較有極其顯著性差異(P<0.001)。祛風(fēng)除濕方組有較為顯著差異(P<0.05)。④在5％濃度下，MTX組和消銀解毒飲組對體外培養(yǎng)角質(zhì)形成細(xì)胞COLO-16分泌VEGF有抑制作用，消銀解毒飲組的抑制作用更為明顯，與對照組相比有極其顯著的差異。在10％濃度下，消銀解毒飲組、解毒方組及MTX組對COLO-16細(xì)胞分泌VEGF均有抑制作用，其中消銀解毒飲組和解毒方組與對照組比較有極其顯著性差異(消銀解毒飲組P<0.001，解毒方組P<0.

8、01)。在20％濃度下，消銀解毒飲組、解毒方組、涼血方組以及MTX組對COLO-16細(xì)胞分泌VEGF均有抑制作用，其中消銀解毒飲組、解毒方組及MTX組與對照組比較有極其顯著性差異(P<0.001)。消銀解毒飲組、解毒方組涼血方組及MTX組隨著含藥血清濃度的升高VEGF含量降低，兩者呈負(fù)相關(guān)。 結(jié)果表明：①消銀解毒飲能抑制銀屑病患者角質(zhì)形成細(xì)胞的異常增殖并誘導(dǎo)其凋亡。②消銀解毒飲對患者血管內(nèi)皮細(xì)胞的過度增生亦具有的抑制作用。③消銀

9、解毒飲還可抑制患者角質(zhì)形成細(xì)胞分泌血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子。④在消銀解毒飲的拆方中，涼血藥物對抑制細(xì)胞的過度增殖發(fā)揮主要作用，解毒藥物對抑制角質(zhì)形成細(xì)胞分泌VEGF起主要作用；而三組藥物的協(xié)同配合可使各種作用明顯加強(qiáng)，從而對銀屑病的有效治療發(fā)揮更好的作用。⑤消銀解毒飲除通過免疫調(diào)節(jié)而發(fā)揮其治療作用外，還可通過對角質(zhì)形成細(xì)胞過度增殖的直接抑制及誘導(dǎo)其凋亡，抑制真皮微血管的異常增生而發(fā)揮治療作用。消銀解毒飲可通過多個(gè)環(huán)節(jié)，多個(gè)靶點(diǎn)對銀屑病發(fā)揮治