分子生物學(xué)方法在鑒別魚(yú)糜制品原料魚(yú)種中的應(yīng)用.pdf

1、隨著我國(guó)水產(chǎn)加工業(yè)的發(fā)展，特別是魚(yú)糜制品產(chǎn)量的不斷增加，水產(chǎn)加工原料的品質(zhì)控制變得尤為重要。為了保護(hù)某些種群，確保食品生產(chǎn)嚴(yán)格遵照規(guī)范進(jìn)行，同時(shí)避免假冒現(xiàn)象，保護(hù)消費(fèi)者權(quán)益，水產(chǎn)制品中魚(yú)種的鑒別已經(jīng)成為消費(fèi)者和質(zhì)量檢測(cè)部門共同關(guān)注的熱點(diǎn)。 鑒于魚(yú)糜制品水產(chǎn)加工程度較高，經(jīng)各工序如高溫、切割、添加調(diào)料和色素等處理后，已很難通過(guò)形態(tài)、味覺(jué)等常規(guī)感官鑒定方法對(duì)其魚(yú)種進(jìn)行準(zhǔn)確的辨別，而對(duì)于食品中原料成分的鑒定，我國(guó)至今還缺乏相關(guān)的檢測(cè)標(biāo)

2、準(zhǔn)。因此，必須盡快摸索建立一條有效、實(shí)用的魚(yú)種鑒定技術(shù)。 本文探索了利，用分子生物學(xué)技術(shù)來(lái)檢測(cè)魚(yú)糜制品中原料魚(yú)種，通過(guò)PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))方法，對(duì)水產(chǎn)品mt-DNA中的16SrRNA基因片段進(jìn)行測(cè)序，對(duì)魚(yú)種進(jìn)行鑒別。本文先對(duì)新鮮的活魚(yú)通過(guò)上面的方法進(jìn)行了鑒定，通過(guò)比對(duì)，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)所得序列與基因庫(kù)中的序列相吻合，說(shuō)明該法用于魚(yú)種鑒別是可行的。然后以食品學(xué)院自制的白鰱魚(yú)丸及超市購(gòu)買回來(lái)的含有兩種組分的鱈魚(yú)丸、章魚(yú)餅和國(guó)外蟹柳作為原

3、料，采用普通酚-氯仿抽提法進(jìn)行基因組DNA提取、選用16SrRNA基因作為目的基因，利用16Sar(L2510)CGCCTGTTTATCAAAAACAT和16Sbr(H3080)CCGGTCTGAACTCAGATCACGT兩條序列作為引物，對(duì)16S rRNA進(jìn)行：PCR擴(kuò)增、克隆、測(cè)序，從而獲得原料產(chǎn)品的16S rRNA基因部分片段序列，通過(guò)運(yùn)用BLAST。軟件，將16S rRNA部分片段序列和Genbank中更多的序列進(jìn)行比較，找到相

4、似性最高的序列，根據(jù)同源性理論，做出魚(yú)種鑒定。 通過(guò)實(shí)驗(yàn)，本文確立了魚(yú)糜制品基因組DNA的提取方法、優(yōu)化了PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系、PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件。對(duì)最終測(cè)序獲得的16S rRNA基因部分片段序列，運(yùn)用clustwal w軟件進(jìn)行序列比對(duì)時(shí)發(fā)現(xiàn)：自制白鰱魚(yú)丸的16S rRNA基因部分片段序列與白鰱肌肉的保持一致。而對(duì)于超市買回的魚(yú)糜制品(含有豬肉和魚(yú)糜)，運(yùn)用BLAST軟件，將獲得的序列與Genbank中的序列進(jìn)行同源性比較時(shí)，結(jié)