SIc33a1錯(cuò)義突變S113R導(dǎo)致小鼠純合胚胎早期致死.pdf

1、[研究背景]
　　 SLC33A1(Solutecarrierfamily33，member1)是在研究神經(jīng)節(jié)苷脂O-乙?；倪^程中被發(fā)現(xiàn)的一個(gè)基因，位于人類染色體3q25，因?yàn)槠淇梢詫⒓?xì)胞質(zhì)中的乙酰輔酶A轉(zhuǎn)運(yùn)至高爾基體，為神經(jīng)節(jié)苷脂O-乙?；峁┮阴；?，所以又名AT-1(theacetyl-CoAtransporter1)。研究發(fā)現(xiàn)很多內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白可以被SLC33A1調(diào)節(jié)，包括β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1(β-siteAPPcle

2、avingenzyme1，BACE1)、淀粉樣蛋白前體（amyloidproteinprecursor，APP）和低密度脂蛋白受體(lowdensitylipoproteinreceptor，LDLR)等，這些蛋白質(zhì)在翻譯修飾后對于膜結(jié)構(gòu)的組裝和分泌蛋白的運(yùn)輸有重要作用。如果SLC33A1的表達(dá)異常，則會(huì)引起一系列神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)的疾病，如散發(fā)性肌萎縮側(cè)索硬化(amyotrophiclateralsclerosis，ALS)、晚發(fā)性阿爾茨海

3、默病(Alzheimer'sdisease，AD)等。
　　 本實(shí)驗(yàn)室2008年在山東青島地區(qū)發(fā)現(xiàn)了一個(gè)遺傳性痙攣性截癱(hereditaryspasticparaplegia，HSP)大家系，呈常染色體顯性遺傳。采用全基因組掃查方法和定位候選策略確定人類SLC33A1基因是該家系的致病基因，患者均攜帶S113R錯(cuò)義突變，家系中的正常個(gè)體和群體中未檢測到該突變。斑馬魚實(shí)驗(yàn)顯示，抑制斑馬魚slc33a1基因表達(dá)影響運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元軸突生

4、長，這種異常能被人類野生型SLC33A1基因拯救而不能被突變型拯救。由以上研究可知，SLC33A1對于維持神經(jīng)元正常功能非常重要，但SLC33A1表達(dá)異常導(dǎo)致HSP的作用機(jī)制尚不明確，因此，有必要深入研究和探討SLC33A1蛋白的功能和作用機(jī)制。
　　 [研究目的]
　　 通過構(gòu)建slc33a1突變基因敲入小鼠模型，檢測SLC33A1突變對小鼠表型的影響，以探討SLC33A1的功能。
　　 [研究方法]
　

5、　 構(gòu)建slc33a1突變基因敲入小鼠模型，并通過Slc33a1突變基因敲入小鼠的雜合子與雜合子交配，檢測子代小鼠基因型是否符合預(yù)期分離比例。如果不能得到純合子新生小鼠，提示純合子小鼠在胚胎期致死，則通過解剖雜合子與雜合子交配的孕鼠分離得到不同胚胎時(shí)期的胎鼠(E3.5、E7.5、E18.5)，利用單純PCR擴(kuò)增法和PCR-RFLP法對胎鼠進(jìn)行基因型鑒定。根據(jù)以上各個(gè)發(fā)育時(shí)期胚胎的基因型鑒定和分型結(jié)果，確定純合子小鼠的致死時(shí)間。

6、　　 [研究結(jié)果]
　　 成功構(gòu)建slc33a1突變基因敲入小鼠模型。對雜合子小鼠交配子代基因型分析結(jié)果顯示，可以獲得預(yù)期比例的雜合子，但不能得到純合子小鼠，提示純合子小鼠胚胎期致死。通過解剖與雜合子雄鼠交配的雜合子孕鼠，得到的E7.5和E18.5胚胎均無純合子，E3.5胚胎有少量純合子存活。
　　 [結(jié)論]
　　 SLC33A1基因突變導(dǎo)致純合子小鼠胚胎早期致死，SLC33A1對早期胚胎發(fā)育有非常重要的作用。