雙酚A對(duì)小鼠早期胚胎體外發(fā)育的影響.pdf

1、環(huán)境雌激素(environmental estrogens)，又稱環(huán)境內(nèi)分泌干擾物質(zhì)(endocrine disruptors，EDs)，是指一類存在環(huán)境中能干擾人或動(dòng)物體內(nèi)分泌系統(tǒng)并導(dǎo)致異常效應(yīng)的物質(zhì)。環(huán)境雌激素對(duì)人類生存環(huán)境的損害正在日益成為人類面臨的一個(gè)嚴(yán)峻問題。環(huán)境雌激素能夠影響自然界生物包括人類的健康，導(dǎo)致各種疾病。大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，EDs能夠影響胚胎的發(fā)育甚至導(dǎo)致畸形，但其作用機(jī)制非常復(fù)雜，尤其在分子機(jī)理方面目前不甚明了。最

2、近研究表明，即使在極低的濃度下，環(huán)境雌激素對(duì)早期胚胎也有毒性作用，甚至對(duì)胚胎的后續(xù)發(fā)育也能產(chǎn)生致命危害。對(duì)雙酚A(bisphenolA，BPA，一種常見的環(huán)境雌激素)誘發(fā)早期胚胎凋亡及其分子機(jī)制的研究，能夠?yàn)榄h(huán)境毒物致病機(jī)理的研究提供理論依據(jù)。 本實(shí)驗(yàn)在KSOM培養(yǎng)基中添加不同濃度(10<'-5>，10<'-7>，10<'-9>mol/L)的BPA體外培養(yǎng)早期胚胎，然后，通過形態(tài)學(xué)觀察來統(tǒng)計(jì)BPA對(duì)早期胚胎發(fā)育率的影響；同時(shí)用

3、TUNEL原位凋亡檢測試劑盒檢測胚胎細(xì)胞的凋亡狀況；應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡檢測細(xì)胞色素C和Bcl-2家族蛋白(Bax、Bcl-2)的表達(dá)變化，并且用巢式RT-PCR檢測Bcl-2家族基因(Bax、Bcl-2、Bcl-xl)的表達(dá)變化。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明： 1．早期胚胎體外培養(yǎng)結(jié)果顯示，在囊胚期，10<'-5>mol/LBPA組能夠顯著降低胚胎的囊胚發(fā)育率，而10<'-9>mol/L BPA組能夠顯著增加胚胎的囊胚發(fā)育率。但

4、是在其他發(fā)育時(shí)期，BPA對(duì)早期胚胎發(fā)育率的影響不明顯。 2． TUNEL凋亡檢測實(shí)驗(yàn)證明，經(jīng)BPA處理后，在4細(xì)胞、8細(xì)胞期和桑椹胚期的各BPA處理組和對(duì)照組都未檢測到明顯的TUNEL陽性信號(hào)；而在囊胚期，10<'-9>mol/L BPA組與對(duì)照組相比發(fā)生凋亡的胚胎比率減少，但是隨著BPA濃度的進(jìn)一步增加，發(fā)生凋亡的胚胎比率逐漸增加。 3．激光共聚焦顯微鏡檢測細(xì)胞色素C結(jié)果顯示：在桑椹胚期和囊胚期，隨著BPA處理濃度

5、的升高，釋放細(xì)胞色素C的胚胎比率逐漸增加，說明細(xì)胞色素C參與了BPA誘導(dǎo)胚胎細(xì)胞凋亡的過程，這一過程是通過線粒體通路來調(diào)節(jié)的。 4．巢式RT-PCR結(jié)果顯示：在各時(shí)期中，隨著BPA處理濃度的升高，Bcl-2基因表達(dá)下調(diào)，而Bcl-xl基因表達(dá)上調(diào)，但是Bax基因表達(dá)變化不明顯。Bcl-2家族蛋白在激光共聚焦顯微鏡檢測中也得到相同的結(jié)果。Bcl-2、Bax、Bcl-xl的表達(dá)變化證明，這些基因在BPA誘導(dǎo)胚胎細(xì)胞凋亡過程中起重要