氨基酸對(duì)小鼠胚胎體外發(fā)育的影響.pdf

1、以昆明小鼠體內(nèi)受精胚胎(原核胚)為試驗(yàn)材料,探討氨基酸對(duì)昆明小鼠體內(nèi)受精胚胎體外發(fā)育的影響,旨在尋找一種能有效支持昆明小鼠胚胎體外發(fā)育的氨基酸組成,優(yōu)化小鼠胚胎體外培養(yǎng)體系。并且,為其它哺乳動(dòng)物胚胎的體外培養(yǎng)提供參考和借鑒。 論文包括四個(gè)部分,研究結(jié)果如下： (1)研究了模擬小鼠輸卵管液水平的氨基酸(OAA)和Sigma氨基酸(SAA)對(duì)小鼠原核胚各個(gè)發(fā)育階段的影響,并以不添加氨基酸組作為對(duì)照。結(jié)果顯示,三組之間的2細(xì)胞

2、率為88.74％、71.28％和69.51％,1倍OAA組顯著高于未添加氨基酸組和SAA組(P<0.05);三組之間的4細(xì)胞率、桑椹胚率、囊胚率和囊胚孵化率差異不顯著(P>0.05),但1倍OAA組的培養(yǎng)效率較佳。 (2)研究了1倍、0.5倍、0.25倍和0倍濃度的OAA對(duì)小鼠原核胚發(fā)育的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn),四組間的2細(xì)胞率分別為89.51％、78.36％、74.62％和74.68％,1倍OAA組顯著地高于0.25和0倍OAA組(P

3、<0.05);4細(xì)胞率分別為66.28％、71.27％、71.61％和52.50％,0.5和0.25倍OAA組顯著高于0倍OAA組(P<0.05);桑椹胚率分別為44.59％、58.77％、50.96％和41.78％,0.5倍OAA組顯著高于未添加OAA,組(P<0.05);囊胚率分別為29.09％、41.71％、33.26％和22.18％,0.5倍OAA組顯著高于0和1倍OAA組(P<0.05);各細(xì)胞水平上其它各組間差異不顯著(P>

4、0.05),除了2細(xì)胞外,其它細(xì)胞水平上以0.5倍OAA組的培養(yǎng)效果最佳。 (3)結(jié)合以上兩個(gè)試驗(yàn)的結(jié)果,對(duì)小鼠胚胎采取分段培養(yǎng),在1倍OAA組中培養(yǎng)24 h后再移入含SAA、0.5倍OAA和1倍OAA組的培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),三組的囊胚率分別為13.23％、28.46％和23.77％,0.5倍OAA組顯著高于SAA組(P<0.05);各細(xì)胞水平上其它各組間差異不顯著(P>0.05),但以0.5倍OAA組最高。 (

5、4)將小鼠原核胚在含有1倍ONEAA和X3的HTF培養(yǎng)液中(25μL/滴)分別培養(yǎng)24 h、48 h和72 h后再添加25μL含有1倍模擬輸卵管液水平的非必需氨基酸(ONEAA)和2倍模擬輸卵管液水平的必需氨基酸(OEAA)的HTF培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：三組間桑椹胚率分別為41.99％、50.76％和61.53％,72 h添加OEAA組顯著高于24 h添加OEAA組(P<0.05);囊胚率分別為21.69％、35.64％和45.26

6、％,72 h添加OEAA組極顯著地高于24 h添加OEAA組(P<0.01),48 h添加OEAA組顯著地高于24h添加OEAA組(P<0.05);囊胚孵化率分別為4.44％、10.71％和22.49％,72 h添加OEAA組極顯著地高于24 h添加OEAA組(P<0.01),同時(shí)顯著高于48 h添加OEAA組(P＜0.05),各細(xì)胞水平上其它各組間差異不顯著(P＞0.05),但以72 h添加OEAA組為最高。OEAA對(duì)小鼠桑椹胚前胚胎