氨基酸對(duì)延邊黃牛體細(xì)胞克隆重組胚發(fā)育的影響.pdf

1、氨基酸是體外培養(yǎng)液的重要成分，目前應(yīng)用的多種培養(yǎng)液中都含有必需/非必需氨酸，但是很少有針對(duì)單一氨基酸或聯(lián)合添加幾種氨基酸對(duì)胚胎發(fā)育影響的研究報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)主要研究了培養(yǎng)液中添加谷氨酰胺、牛磺酸、谷氨酸、丙氨酸、脯氨酸、甘氨酸、精氨酸以及谷氨酰胺與?；撬崧?lián)合添加對(duì)重組胚卵裂、8-16C發(fā)育及囊胚發(fā)育的影響，以期從中探尋氨基酸是否能夠提高延邊黃牛體細(xì)胞克隆效率。本次實(shí)驗(yàn)是在體外培養(yǎng)液中分別添加以上幾種不同種類不同濃度的氨基酸，對(duì)延邊黃牛體細(xì)胞

2、克隆重組胚進(jìn)行體外培養(yǎng)，然后觀察重組胚的發(fā)育情況。
　　實(shí)驗(yàn)得出的結(jié)果如下：
　　1．在體外培養(yǎng)液中添加不同濃度的谷氨酰胺對(duì)延邊黃牛體細(xì)胞克隆重組胚發(fā)育的影響的試驗(yàn)中，添加1.0 mmol/L谷氨酰胺組的重組胚的卵裂率、8-16C發(fā)育率均高于其他濃度，囊胚率顯著高于其他濃度組（P<0.05），所以確定1.0 mmol/L是單獨(dú)應(yīng)用谷氨酰胺時(shí)最適合延邊黃牛卵母細(xì)胞體細(xì)胞克隆重組胚發(fā)育的最佳濃度。
　　2．在體外培養(yǎng)液中添

3、加不同濃度的牛磺酸對(duì)延邊黃牛體細(xì)胞克隆重組胚發(fā)育的影響的試驗(yàn)中，添加7mmol/L和14 mmol/L?；撬峤M的重組胚的卵裂率高于其它濃度組，8-16C發(fā)育率和囊胚發(fā)育率顯著高于其它濃度組（P<0.05），但7mmol/L組在重組胚的卵裂率、8-16C發(fā)育率、囊胚發(fā)育率上均高于14mmol/L組。所以確定7mmol/L是單獨(dú)應(yīng)用?；撬釙r(shí)最適合延邊黃牛卵母細(xì)胞體細(xì)胞克隆重組胚發(fā)育的最佳濃度。
　　3．在體外培養(yǎng)液中同時(shí)添加谷氨酰胺和

4、?；撬釋?duì)延邊黃牛體細(xì)胞克隆重組胚發(fā)育的影響的試驗(yàn)中，僅有重組胚的卵裂率略高于單獨(dú)添加組，而囊胚發(fā)育率上聯(lián)合添加組顯著低于單獨(dú)應(yīng)用組（P<0.05）。
　　4．在體外培養(yǎng)液中添加不同濃度的谷氨酸對(duì)延邊黃牛體細(xì)胞克隆重組胚發(fā)育影響的試驗(yàn)中，各濃度組之間重組胚的卵裂率和8-16C發(fā)育率差異不顯著，囊胚發(fā)育率上6.4mmol/L組顯著高于其它濃度組（P<0.05），所以確定6.4mmol/L是單獨(dú)應(yīng)用谷氨酸時(shí)最適合延邊黃牛卵母細(xì)胞體細(xì)胞克

5、隆重組胚發(fā)育的最佳濃度。
　　5．在體外培養(yǎng)液中添加不同濃度的精氨酸對(duì)延邊黃牛體細(xì)胞克隆重組胚發(fā)育影響的試驗(yàn)中，各濃度組之間重組胚的卵裂率和8-16C發(fā)育率差異不顯著，囊胚發(fā)育率上0.061mmol/L濃度組顯著高于對(duì)照組（P<0.05），各實(shí)驗(yàn)組之間差異不顯著，但是0.061mmol/L組的囊胚發(fā)育率高于其它實(shí)驗(yàn)組，所以確定0.061mmol/L是單獨(dú)應(yīng)用精氨酸時(shí)最適合延邊黃牛卵母細(xì)胞體細(xì)胞克隆重組胚發(fā)育的最佳濃度。
　　

6、6．在體外培養(yǎng)液中添加不同濃度的甘氨酸對(duì)延邊黃牛體細(xì)胞克隆重組胚發(fā)育影響的試驗(yàn)中，各濃度組之間重組胚的卵裂率和8-16C發(fā)育率差異不顯著，囊胚發(fā)育率上7mmol/L組顯著高于對(duì)照組和最高濃度組（21mmol/L，P<0.05），略高于14mmol/L濃度組，所以確定7mmol/L是單獨(dú)應(yīng)用甘氨酸時(shí)最適合延邊黃牛卵母細(xì)胞體細(xì)胞克隆重組胚發(fā)育的最佳濃度。
　　7．在體外培養(yǎng)液中添加不同濃度的丙氨酸對(duì)延邊黃牛體細(xì)胞克隆重組胚發(fā)育影響的試

7、驗(yàn)中，0.586mmol/L濃度的丙氨酸可以促進(jìn)重組胚的卵裂，顯著高于對(duì)照組（P<0.05），各濃度組之間的8-16C發(fā)育率上差異不顯著，1.172 mmol/L濃度的丙氨酸能夠促進(jìn)囊胚的發(fā)育，顯著高于對(duì)照組（P<0.05），更適合延邊黃牛體細(xì)胞克隆重組胚的體外培養(yǎng)。
　　8．在體外培養(yǎng)液中添加不同濃度的脯氨酸對(duì)延邊黃牛體細(xì)胞克隆重組胚發(fā)育影響的試驗(yàn)中，各組的卵裂率、8-16C發(fā)育率、囊胚率之間差異不顯著，但是0.143mmol/