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文檔簡(jiǎn)介
1、本實(shí)驗(yàn)對(duì)延邊黃牛耳皮膚成纖維細(xì)胞冷凍保存及作為核移植供體細(xì)胞對(duì)重組胚發(fā)育的影響進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)以延邊黃牛耳皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)、冷凍保存為基礎(chǔ),使用了組織塊法和酶法結(jié)合,成功的培養(yǎng)出了延邊黃牛耳皮膚成纖維細(xì)胞系,對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行冷凍保存,并觀察其解凍后細(xì)胞的生長(zhǎng)情況,探索出最佳的冷凍保存體系。并將冷凍解凍后的成纖維細(xì)胞作為核供體,進(jìn)行體細(xì)胞核移植。結(jié)果表明:
1.通過(guò)組織塊法+酶法培養(yǎng),獲得了延邊黃牛成纖維細(xì)胞系。進(jìn)行冷凍的組織
2、塊在解凍后同樣能培養(yǎng)出細(xì)胞。與未冷凍組織比較,活組織塊數(shù)目減少,凍存組織的細(xì)胞游離及貼壁時(shí)間增加;
2.冷凍復(fù)蘇后的延邊黃牛成纖維細(xì)胞,在復(fù)蘇后2~4h即開(kāi)始貼壁,24h大部分細(xì)胞已經(jīng)貼壁,貼壁率可達(dá)到76%。解凍后細(xì)胞培養(yǎng)傳代2~3代后,細(xì)胞的生長(zhǎng)速度和形態(tài)與凍存前無(wú)太大差異;
3.細(xì)胞凍存試驗(yàn)中,以甘油、DMSO和乙二醇為冷凍保護(hù)劑,添加20%血清的DMEM為基礎(chǔ)液,得到最適合實(shí)驗(yàn)操作的冷凍保護(hù)劑為甘油濃度10%
3、,能滿足延邊黃牛耳皮膚成纖維細(xì)胞長(zhǎng)期保存的需要;
4.從生長(zhǎng)曲線可以看出,以低糖DMEM培養(yǎng)的冷凍后延邊黃牛耳皮膚成纖維細(xì)胞,傳代后滯留期短,約1~2天,之后為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,持續(xù)六天左右,第7天達(dá)到高峰,第8天細(xì)胞接觸抑制出現(xiàn)死亡,細(xì)胞數(shù)量開(kāi)始減少,進(jìn)入平臺(tái)期,凍存后細(xì)胞的生長(zhǎng)規(guī)律與未進(jìn)行冷凍細(xì)胞的基本一致;
5.實(shí)驗(yàn)對(duì)冷凍前后的延邊黃牛皮膚成纖維細(xì)胞作了染色體檢查,結(jié)果表明:冷凍后的細(xì)胞仍然保留著染色體數(shù)目的完整性,
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