熒光輔助去核在延邊黃牛體細胞核移植中的應(yīng)用.pdf

1、本研究采用延邊黃牛耳皮膚成纖維細胞作為供核細胞，探討使用熒光（UV）輔助去核法對延邊黃牛體細胞克隆效率的影響。探尋一種尋求一種操作簡單、相對無損傷、去核效率高的去核方法，從而為體細胞核移植效率的提高打下基礎(chǔ)，為產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供理論依據(jù)。試驗結(jié)果：
　　1、比較5μg/mLHoechst333420 min、10 min、20 min、30 min，40 min對延邊黃牛卵母細胞的染色效率。結(jié)果顯示在染色效率上20 min、30 mi

2、n、40 min的染色效率明顯高于0 min和10 min。
　　2、熒光輔助去核法與擠壓去核法對卵母細胞去核率進行比較。在去核準(zhǔn)確率上，熒光輔助去核法達到了100％的去核率，擠壓去核法顯著低于熒光輔助去核法。
　　3、比較在10s、15s、20s、25s、30s的UV操作時間里卵裂率和囊胚發(fā)育率情況。結(jié)果顯示：在卵裂率上UV照射時間10s組、15s組、20s組、25s組無差別，要優(yōu)于UV照射時間為30s組。在囊胚發(fā)育率上1

3、0s組、15s組、20s組最高，25s組次之，30s組的囊胚發(fā)育率最低。
　　4、本試驗比較熒光輔助去核法與擠壓去核法對重組胚發(fā)育率的影響。同時以孤雌發(fā)育組為對照組，結(jié)果表明，5組卵裂率差異均不顯著，但囊胚發(fā)育率上，對照組（孤雌發(fā)育組）最高，20 min染色去核組、30 min染色去核組和40 min染色去核組無明顯差異，但明顯高于擠壓法去核組。
　　5、本實驗是卵母細胞經(jīng)過5μg/mLHoechst3334220 min的