昆白小鼠體細(xì)胞核移植.pdf

1、　　自1998年首例體細(xì)胞克隆小鼠成功后，克隆小鼠不僅在數(shù)量和品系上不斷增多，而且供核細(xì)胞種類和也在增加。昆白小鼠體細(xì)胞克隆未見(jiàn)成功報(bào)道，昆白小鼠是我國(guó)自主繁殖的近交系小鼠，由于遺傳背景清楚、生殖周期短、環(huán)境適應(yīng)能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，是國(guó)內(nèi)良好的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。昆白小鼠的體細(xì)胞克隆不僅對(duì)克隆機(jī)理研究，而且對(duì)遺傳學(xué)、胚胎學(xué)和分子生物學(xué)等領(lǐng)域都有重要的意義?！　”狙芯繌?個(gè)方面對(duì)昆白小鼠體細(xì)胞核移植進(jìn)行了研究：供體細(xì)胞的采集、Spindle-vie

2、w對(duì)卵母細(xì)胞的去核效率的影響，活力檢測(cè)和核型分析，不同注核方法對(duì)克隆效率的影響。1.通過(guò)對(duì)分離培養(yǎng)的1-6代的供核細(xì)胞進(jìn)行核型分析和活力測(cè)定，各代間核型正常，細(xì)胞活力無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，證明用1-6代的細(xì)胞作為供核細(xì)胞是可行的。2.Spindle-view協(xié)助的卵母細(xì)胞去核。分別用Spindle-view協(xié)助和盲吸法對(duì)注射hCG后10和12h的小鼠卵母細(xì)胞去核，用Spindle-view協(xié)助的去核率分別為95﹪和87﹪，用盲吸

3、法為90﹪和22﹪。因此用Spindle-view協(xié)助下對(duì)hCG后10h卵的去核不僅去核率高，而且對(duì)卵母細(xì)胞損傷小。3.培養(yǎng)液和激活方法的篩選。用正常胚胎篩選培養(yǎng)液，CZB和M16克服2細(xì)胞阻滯的比率分別為76.9﹪、56.2﹪，經(jīng)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)差異顯著(P＜0.05)，胚胎其他發(fā)育階段雖無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，但CZB比M16稍高，因此選用CZB培養(yǎng)重組胚。分別用電刺激，酒精，SrCl2和鈣離子載體4種不同的激活方法對(duì)卵母細(xì)胞的激活，

4、激活率分別為40.8﹪、90.1﹪、60.3﹪、88.4﹪，發(fā)現(xiàn)用酒精和SrCl2激活效果較好，兩組發(fā)育到桑椹胚的比率分別為16.4﹪和3.6﹪，經(jīng)比較酒精激活比SrCl2激活效果好(P＜0.05)。4.不同注核方法對(duì)克隆效率的影響。用卵周隙注射和卵胞質(zhì)注射兩種方法注核發(fā)現(xiàn)用電融合方法融合率34.8﹪，有13枚重構(gòu)胚卵裂，其中3枚發(fā)育到3-4cell，1枚發(fā)育到6-cell，卵胞質(zhì)注射成功率8.2﹪，激活培養(yǎng)后沒(méi)有卵裂的。因此卵周隙注射