延邊奶山羊-綿羊體細(xì)胞克隆胚融合、激活條件的研究.pdf

1、異種間的體細(xì)胞克隆技術(shù)為保護(hù)和拯救珍稀瀕危動(dòng)物、人類器官移植開(kāi)辟了一條嶄新的途徑，目前，雖然有種間體細(xì)胞核移植動(dòng)物出生，但是較低的成功率限制了這項(xiàng)技術(shù)在實(shí)踐中的應(yīng)用。種間核移植仍面臨著很大的困難，需要尋求適宜的供受體細(xì)胞組合及早期胚胎發(fā)育的環(huán)境。為了給動(dòng)物種間核移植研究積累知識(shí)和經(jīng)驗(yàn)，本實(shí)驗(yàn)對(duì)延邊奶山羊-綿羊重構(gòu)胚的融合、激活做了預(yù)先一步的研究。
　　本實(shí)驗(yàn)采用延邊奶山羊耳皮膚成纖維細(xì)胞為供核細(xì)胞，以綿羊MⅡ期去核的卵母細(xì)胞為核移

2、植受體，構(gòu)建了山羊-綿羊異質(zhì)重構(gòu)胚。我們?cè)O(shè)計(jì)了一系列的試驗(yàn)以優(yōu)化延邊奶山羊-綿羊重構(gòu)胚的融合激活效果，探討了不同融合電場(chǎng)強(qiáng)度、脈沖次數(shù)、脈沖時(shí)程、融合后平衡時(shí)間、融合液濃度及激活方法對(duì)重構(gòu)胚融合率及重構(gòu)胚體外發(fā)育率的影響。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　1、甘露醇濃度為0.25mol/L、0.28mol/L時(shí)重構(gòu)胚的融合率（50.12％vs52.74%）和卵裂率（53.50%vs55.52%）差異不顯著（P>0.05），但與0.3

3、0mol/L組相比差異顯著（P<0.05），0.28 mol/L組的桑椹胚發(fā)育率（17.36%）明顯高于其他兩組，相比差異顯著（P<0.05）；
　　2、電場(chǎng)強(qiáng)度為1000v/cm時(shí)重構(gòu)胚的融合率與其它各組之間相比差異顯著（P<0.05），電場(chǎng)強(qiáng)度為1200v/cm，1400v/cm以及1600v/cm時(shí)重構(gòu)胚的融合率之間差異不顯著（P>0.05）；1400v/cm的卵裂率（60.84%）和囊胚率（8.14%）最高，與1200 v

4、/cm相比差異不顯著（P>0.05），但與其他各組相比差異顯著（P<0.05）；
　　3、2次脈沖的融合率與1次脈沖相比差異顯著（P<0.05），但與3次電脈沖相比差異不顯著（P>0.05）；2次脈沖的卵裂率（69.84%）和囊胚率（6.14%）顯著的高于1次和3次脈沖，差異顯著（P<0.05）；，但1次和3次脈沖之間差異不顯著（P>0.05）。
　　4、脈沖時(shí)程為40μs時(shí)重組胚的融合率（65.56%）高于其他各組，但差異

5、不顯著（P>0.05），但是卵裂率（58.90%）與其他三組（10μs、20μs、80μs）相比差異顯著（P<0.05）。脈沖時(shí)程為40μs的桑椹胚發(fā)育率為18.16%，與10μs組、80μs組相比差異顯著（P<0.05），但與20μs組相比差異不顯著（P>0.05）
　　5、30min、60min、90min、120min不同的平衡時(shí)間的融合率差異不顯著（p>0.05），但90min組的卵裂率（70.62%）顯著高于其他三組，相

6、比差異顯著（p<0.05）。90min組的囊胚率為8.10%，顯著高于30min和120min組，但與60min組相比差異不顯著（p>0.05）。
　　6、EH+CHX、EH+DMAP、Ion+CHX、Ion+DMAP四種激活方式卵裂率方面差異不顯著，但是在桑椹胚發(fā)育率方面，Ion+6-DMAP組（21.30%）顯著高于其他三組（18.90%、14.12%、15.34%），EH+CHX組與EH+6-DMAP組和Ion+6-DMAP