牛體細胞克隆胚構(gòu)建方法研究.pdf

1、分類號Q343UDC密級編號1012630511011論文題目牛體細胞克隆胚構(gòu)建方法研究STUDYONBOVINESOMATICCELLNUCLEARTRANSFER研究生指導老師專業(yè)研究方向?qū)W院賈瑞貞李煌副教授動物學動物細胞工程生命科學學院零零八年五月你氣賈瑞貞牛體細胞克隆胚構(gòu)建方法研究牛體細胞克隆胚構(gòu)建方法研究摘任石3(本研究以牛的去透明帶體細胞核移植為主題，比較了牛卵母細胞的不同成熟培養(yǎng)方法分離并傳代培養(yǎng)了牛耳成纖維體細胞研究了牛

2、體細胞核移植過程的去核方法、融合條件等對重構(gòu)胚發(fā)育的影響，旨在探索一種簡化的核移植操作程序。1.以抽吸法采集了屠宰母牛卵巢卵母細胞，并重點探討了添加不同種類及不同劑量激素的培養(yǎng)系統(tǒng)對牛卵母細胞成熟率的影響，即PMSG、HCG、FSH、LH對卵母細胞IVM的影響，在成熟培養(yǎng)液內(nèi)添加這幾類激素可以促進卵母細胞的體外成熟，最高成熟率為81.7%。2.不同成熟培養(yǎng)時間對極體排出率和附著率的影響:成熟培養(yǎng)18一19h，20一Zlh，23一24h日

3、寸，極體排出率分別為76.1%，81.7%，82.2%。消化透明帶后，在成熟培養(yǎng)18一19h，20一Zlh，23一24h日寸，極體附著率分別為77.2%、64.1%，41.3%。結(jié)果表明，成熟培養(yǎng)20一Zlh后去除透明帶處理，其極體排出和附著效果最佳。3.去核效果的比較:采用半卵法和盲切法作對比，結(jié)果顯示半卵法去核率高于盲切法，借助熒光染色達到100%，但所用時間長，去核效率不如盲切法高。4.融合條件的優(yōu)化:在脈沖寬度為40且S、2次脈