人-牛異種體細(xì)胞克隆胚胎構(gòu)建及其線粒體來源檢測.pdf

1、人-動物異種間體細(xì)胞核移植技術(shù)可利用動物的卵母細(xì)胞為核受體，以人類的體細(xì)胞為核供體構(gòu)建異種間體細(xì)胞克隆胚，通過體外培養(yǎng)獲取人源性胚胎干細(xì)胞。這項技術(shù)為獲得人類干細(xì)胞以及人類器官移植開辟了一條嶄新的途徑。但極低的成功率限制了這項技術(shù)在實踐中的應(yīng)用，這可能歸因于體細(xì)胞核在異種卵母細(xì)胞中未能完全再程序化。同時，異種間克隆胚存在廣泛的線粒體雜合現(xiàn)象，即來源于供受體細(xì)胞的兩套線粒體共存。影響異種間克隆胚及克隆后代中線粒體雜合性的因素還不清楚。動物

2、源性線粒體的存在，是人-動物異種體細(xì)胞克隆胚胎應(yīng)用于實踐的一大障礙。 本實驗以體外培養(yǎng)成熟的牛卵母細(xì)胞為核受體，分別以人胎兒成纖維細(xì)胞(HFFs)、牛胎兒成纖維細(xì)胞(BFFs)為核供體構(gòu)建同異種間體細(xì)胞克隆胚，通過體外培養(yǎng)觀察兩者在發(fā)育能力方面的差異。此外，在早期發(fā)育的不同階段(2-、4-、8-、桑椹胚、囊胚)，采用PCR的方法檢測了異種間克隆胚中供受體來源的線粒體DNA(mtDNA)存在情況，以及異種克隆胚胎核基因來源情況。

3、 人-牛異種克隆胚胎構(gòu)建試驗中發(fā)現(xiàn)，試驗的批次效應(yīng)明顯，說明卵母細(xì)胞與供體細(xì)胞的協(xié)調(diào)性有很強(qiáng)的隨機(jī)性，兩者的協(xié)調(diào)性也是影響克隆效率的最關(guān)鍵因素。 同異種間克隆胚的體外發(fā)育結(jié)果表明，同種間克隆胚的體外囊胚發(fā)育率(10.1％)高于異種間克隆胚的體外囊胚發(fā)育率(2.88％)，且這種差異主要是由異種間克隆胚在8-細(xì)胞到桑椹胚期間的發(fā)育能力顯著低于同種間克隆胚(p<0.05)造成的。 對異種間克隆胚核基因來源的檢測表