延邊奶山羊耳成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系的建立.pdf

1、本試驗(yàn)對(duì)延邊奶山羊耳成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)體系進(jìn)行了研究。試驗(yàn)以延邊奶山羊?yàn)檠芯繉?duì)象，采用傳統(tǒng)的組織塊貼壁培養(yǎng)法，成功的培養(yǎng)出了延邊奶山羊耳部皮膚成纖維細(xì)胞系。試驗(yàn)通過(guò)觀察組織塊貼壁情況，觀察原代培養(yǎng)細(xì)胞和傳代培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)及生長(zhǎng)狀況，繪制出延邊奶山羊成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，以及對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色體核研究，目的是確定該品種細(xì)胞從第5代開(kāi)始至13代之間的成纖維細(xì)胞，生長(zhǎng)狀況快速良好，細(xì)胞整齊，核型數(shù)目正常，可以作為體細(xì)胞核移植以及轉(zhuǎn)基因等試驗(yàn)的核供體

2、。同時(shí)也從細(xì)胞水平上對(duì)延邊奶山羊的這一特有地方品種進(jìn)行有效的保存和利用。結(jié)果表明：
　　1、通過(guò)組織塊貼壁培養(yǎng)法，成功培養(yǎng)出了延邊奶山羊成纖維細(xì)胞系。
　　2、確定原代培養(yǎng)最適血清濃度為15％，此濃度下原代細(xì)胞游離出的時(shí)間約為7天。從組織塊貼壁率的試驗(yàn)中可以證明，點(diǎn)瓶后倒置5～6小時(shí)、后加培養(yǎng)液以及組織塊≤1mm3更利于組織塊貼壁生長(zhǎng)。
　　3、據(jù)觀察原代成纖維細(xì)胞與傳代細(xì)胞形態(tài)基本相似，都呈長(zhǎng)梭形或細(xì)長(zhǎng)條形，或不規(guī)則

3、三角形，細(xì)胞群體呈旋渦狀或者放射狀排列。經(jīng)本試驗(yàn)得出延邊奶山羊原代成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，大約7～10天左右游離出細(xì)胞，細(xì)胞平鋪培養(yǎng)瓶底面一層大約需要20天至一個(gè)半月的時(shí)間，細(xì)胞生長(zhǎng)較為緩慢，這與其他山羊不同。觀察5代至13代之間的細(xì)胞，長(zhǎng)勢(shì)快，形態(tài)規(guī)則，細(xì)胞密集且規(guī)整。
　　4、繪制生長(zhǎng)曲線顯示，延邊奶山羊耳部成纖維細(xì)胞成“S”型曲線生長(zhǎng)，1～4d細(xì)胞處于潛伏期，4～7d為指數(shù)生長(zhǎng)期，7d以后進(jìn)入平臺(tái)期，細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，符合細(xì)胞體外生