猞猁三種組織成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)體系的建立及生物學(xué)特性分析.pdf

1、U D C論文題目研究生 道目娜指導(dǎo)教師 奎熳熬授奎疆副熬授專 業(yè) ．．． ．．動(dòng)物堂． 一一研究方向 動(dòng)物細(xì)胞王猩學(xué) 院 生僉抖堂堂隨二零一三年五月道日娜猞刪三種組織成纖維細(xì)胞體J ' l - 培養(yǎng)體系的建立及生物學(xué)特性分祈猞猁三種組織成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)體系的建立及生物學(xué)特性分析摘要為研究猞猁細(xì)胞體外培養(yǎng)體系及生物學(xué)特性，深入開展猞猁基因組學(xué)及瀕危野生動(dòng)物保護(hù)工程，本研究獲取猞猁心臟、軀體、睪丸三種組織，采用組織塊培養(yǎng)法，用

2、- M E M 培養(yǎng)液進(jìn)行原代、傳代培養(yǎng)，進(jìn)行常規(guī)冷凍和復(fù)蘇，建立了猞猁三種組織成纖維細(xì)胞的體外培養(yǎng)體系，并對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察、生長曲線測(cè)定、微生物污染檢測(cè)、染色體核型分析、熒光蛋白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染表達(dá)等特性研究。結(jié)果顯示： 猞猁心臟、軀體及睪丸來源的組織塊分別在培養(yǎng)5 - - , 6 d 、8 - 9 d 、1 1 - 1 2 d 時(shí)開始有成纖維樣細(xì)胞從中長出。在進(jìn)行傳代時(shí)，這3 種組織來源的細(xì)胞群體倍增時(shí)間均為4 0 h ，通常在4

3、 ～5 d 可鋪滿瓶底；對(duì)比細(xì)胞凍存前后存活率，細(xì)胞復(fù)蘇后活率較凍存前有所下降，但均有較高的存活率，都達(dá)到9 0 ％以上；三種組織細(xì)胞生長曲線均呈“S “ 型，符合體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長規(guī)律，均經(jīng)歷了潛伏期、指數(shù)生長期和停滯期；細(xì)菌、真菌、病毒、支原體等微生物污染檢測(cè)呈陰性；對(duì)猞猁5 0 個(gè)中期分裂細(xì)胞進(jìn)行染色體數(shù)目統(tǒng)計(jì)，染色體數(shù)目為2 n = 3 8 ，為1 9 對(duì)，其中1 8 對(duì)為常染色體，1 對(duì)為性染色體。有約8 8 ％( 4 4 ／