大鼠骨髓基質細胞體外培養(yǎng)的生物學特性.pdf

1、目的：骨創(chuàng)傷后的再生能力提示有能夠自我復制并能多向分化的干細胞存在。一般認為，干細胞存在于骨、骨膜、骨髓及其他由中胚層發(fā)育來的組織中，在出生后仍然有少量干細胞繼續(xù)存在，在機體損傷時參與組織的修復。組織工程的基礎是有功能的細胞，骨組織工程需要大量的成骨細胞。十多年來，國內外學者和臨床工作者對各種組織的細胞成骨能力進行了大量的研究，提出了定向性骨祖細胞、誘導性骨祖細胞和基質干細胞的概念。目前，在研究中使用的作為種子細胞的成骨細胞來源有以下幾

2、種：骨、軟骨、骨外膜、骨髓和骨外組織。越來越多的證據(jù)表明，骨髓基質干細胞(BMSCs)有多分化潛能，移植人體內后可分化為骨、軟骨、肌肉、脂肪、血管內皮、肝臟、神經等多種細胞。能夠作為組織工程中不同細胞的來源：在體內正常循環(huán)中能夠分布于多種組織和器官，可以用于細胞和基因治療。而且取材、分離培養(yǎng)、擴增以及導入外源基因也相對方便。BMSC。通過抽取自體骨髓得到，對病人造成創(chuàng)傷較少，且無免疫排斥反應。因此，BMSCs在實際應用時將具有潛在的優(yōu)勢

3、。本試驗目的是建立一種簡單有效的骨髓基質細胞的體外培養(yǎng)及成骨誘導方法，并探討在體外培養(yǎng)中其增殖和分化的相互關系，總結骨髓基質細胞體外培養(yǎng)的生物學規(guī)律，為將來在體外分離、培養(yǎng)、擴增出大量的有成骨活性的細胞以滿足再造骨組織的需要提供了美好的前景。 方法：沖洗法獲取Weistar大鼠骨髓，用貼壁法分離提純骨髓基質細胞(Bone Marrow Stromal cells BMSCs)，傳至第3代細胞后分組：1.分別用普通培養(yǎng)基和誘導培養(yǎng)

4、基(DMEM加入地米松10<'-7>mmol/L，β-甘油磷酸鈉10mmol/L，維生素C50mg/L)培養(yǎng)10天，每3天換液1次。繪制各自細胞生長曲線。2.分別用普通培養(yǎng)基和誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)15天，每3天換液1次，于第4、7、10、13、16天，檢測兩組的堿性磷酸酶表達量。3.以5×10<'4>/ml密度接種于6孔培養(yǎng)板各1板，各孔放置載玻片，分別加入基礎培養(yǎng)液和誘導培養(yǎng)液培養(yǎng)，每3天換液，20天后分別取出各自細胞爬片行Von koss