大鼠骨髓基質(zhì)細胞體外誘導分化為神經(jīng)樣細胞的實驗研究.pdf

1、目的：骨髓基質(zhì)細胞(bone marrow stromal Cells，BMSCs)作為一種成體干細胞，具有一定的自我更新、高度增殖和多向分化的潛能。在適宜的條件下，可以誘導分化為神經(jīng)樣細胞。BMSCs來源方便，取材較容易，體外培養(yǎng)和擴增的技術條件簡便，具有向神經(jīng)樣細胞分化的潛能。本課題在建立大鼠BMSCs體外分離、培養(yǎng)、純化及擴增體系的基礎上，研究BMSCs在體外培養(yǎng)中的生物學特性，以及向神經(jīng)樣細胞分化的能力，為下一步人骨髓基質(zhì)細胞的

2、體外分離培養(yǎng)奠定基礎，同時為進一步臨床治療提供理論依據(jù)及治療基礎。方法：本實驗采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法，利用BMSCs貼壁速率快的特點，接種早期更換培養(yǎng)基去掉非貼壁細胞，反復換液純化。經(jīng)原代及傳代培養(yǎng)擴增BMSCs后，研究其在體外培養(yǎng)中的生長曲線等生物學特性及其超微結(jié)構(gòu)，進行瑞士染色觀察細胞形態(tài)，免疫細胞化學檢測CD44從而對其鑒定。在此基礎上，通過堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth factor，bFG

3、F)、表皮生長因子(epidermal growth factor，EGF)兩種誘導因子的作用，誘導BMSCs向神經(jīng)細胞分化，觀察細胞形態(tài)變化，以免疫細胞化學檢測β-微管蛋白Ⅲ(β-TubulinⅢ)和神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial acidic fibrillary pro-tein，GFAP)的表達作為觀測指標。結(jié)果： 1.全骨髓接種培養(yǎng)，經(jīng)貼壁法分離純化得到BMSCs，原代可見許多混雜血細胞，生長緩慢，14天達70-80％傳代，

4、至3代時細胞趨于一致，瑞士染色觀察細胞形態(tài)，免疫細胞化學檢測CD44呈(+)．2.本實驗采用bFGF、EGF兩種誘導因子誘導BMSCs向神經(jīng)樣細胞分化，觀察細胞有形態(tài)的變化，免疫細胞化學檢測β-TubulinⅢ(+)和GFAP(+)。結(jié)論：1.在本實驗，通過全骨髓貼壁法分離純化，BMSCs細胞易于獲得，成活率較高，增殖穩(wěn)定，原代呈多形性，至3代形態(tài)趨于一致。2.在體外bFGF、EGF兩種誘導因子可以誘導BMSCs向神經(jīng)樣細胞分化，分化過