骨髓間充質干細胞體外誘導分化為胰島樣細胞及治療糖尿病大鼠的實驗研究.pdf

1、目的：將大鼠骨髓間充質干細胞(Bone Marrow-derived Mesenchymal Stemcells，BM-MSCs)在體外誘導分化為胰島樣細胞，并觀察其對糖尿病大鼠模型的治療作用。
　　方法：1.大鼠BM-MSCs的誘導分化：取2周齡大鼠骨髓，純化、擴增得到BM-MSCs，取P3代BM-MSCs應用流式細胞儀檢測CD29、CD90、CD44和CD34，然后用堿性成纖維細胞生長因子(Basic fibroblast g

2、rowth factors，bFGF)、肝細胞生長因子(Hepatocyte growth factor，HGF)等誘導6天，用β細胞調節(jié)素(Betaeellulin，BTC)、尼克酰胺等誘導12天，應用免疫細胞染色，雙硫腙染色(Dithizone，DTZ)，RT-PCR等檢測誘導情況。并用insulin1(胰島素1)特異性RNA下擾誘導后細胞。
　　2.大鼠糖尿病模型的移植治療：健康雄性SD大鼠，腹腔注射鏈脲佐菌素(Strept

3、ozotocin，STZ)建立糖尿病模型，建模成功后，隨機分為三組：①對照組；②移植誘導的胰島樣細胞組；③移植RNA干擾后的胰島樣細胞組；兩實驗組經(jīng)腎包囊移植Brdu標記的胰島樣細胞，對照組則經(jīng)腎包囊移植相同體積生理鹽水。觀察移植后7、14、21、28d各組糖尿病大鼠血糖變化。28d后處死大鼠取腎臟做免疫組織化學檢查。
　　結果：1.成功將大鼠BM-MSCs純化、擴增，BM-MSCs體外經(jīng)HGF、bFGF等因子誘導后，細胞呈團簇狀

4、，雙硫腙染成紅棕色，免疫細胞染色顯示胰島素呈陽性表達，透射電鏡顯爾其有分泌細胞特點，RT-PCR示insulin1、胰腺十二指腸同源框-1(Pancreatic duodenal homeobox-1，PDX-1)及葡萄糖激酶(Glucokinase，GK)基因表達陽性(P<0.05)，RNA特異性干擾后insulin1基因表達陰性，胰島素蛋白分泌陰性，表明大鼠BM-MSCs可以向胰島樣細胞轉化。
　　2.大鼠腹腔注射STZ后，成

5、功建立糖尿病模型，細胞移植后，對照組和移植干擾細胞組大鼠血糖無明顯好轉(P>0.05)，移植誘導細胞組大鼠血糖與其余兩組和移植前相比較，明顯降低(P<0.05)。Brdu免疫組織化學染色顯示：在腎臟小管上皮可見散在分布的Brdu陽性細胞，胰島素呈陽性表達。
　　結論：1.經(jīng)全骨髓貼壁培養(yǎng)法可獲得較純化BM-MSCs，強表達CD29、CD90、CD44，而CD34微表達；
　　2.大鼠BM-MSCs經(jīng)含bFGF、HGF、BTC