骨髓基質(zhì)干細胞誘導分化為胰島細胞的實驗研究.pdf

1、目的：胰島細胞移植是治療Ⅰ型糖尿病最有希望的方法，由于供體細胞不足和免疫排斥反應等問題，限制了胰島細胞移植技術(shù)的應用。骨髓基質(zhì)干細胞(BMSCs)具有獲得容易，可體外復制和增殖，可以定向誘導分化為特定功能細胞的特征。因此，將BMSCs移植用于治療糖尿病具有重要的臨床應用價值。目前，尚未獲得誘導干細胞向胰島細胞分化的高效誘導方法；取得較好治療效果的干細胞移植途徑尚未確定。本實驗主要探索體外誘導BMSCs分化為胰島素分泌細胞的最佳條件；比較

2、尾靜脈、腎被膜和胰腺內(nèi)注射三種干細胞移植途徑對糖尿病模型動物的治療作用，以篩選出干細胞治療糖尿病的最佳移植途徑。
　　 方法：全骨髓貼壁法分離大鼠BMSCs。體外擴增后，部分細胞用于體外誘導實驗，即向培養(yǎng)體系中添加胰腺提取液、尼克酰胺、Exendin-4及不同濃度的葡萄糖；觀察分化細胞的形態(tài)變化；雙硫腙染色法(DTZ)鑒定胰島素分化細胞的生成；放射免疫法(RIA)檢測上清液中胰島素和C—肽水平。另一部分細胞進行BrdU標記。將標

3、記的BMSCs，經(jīng)尾靜脈、腎被膜和胰腺內(nèi)注射三種途徑，移植入鏈脲佐菌素(STZ)制備糖尿病模型小鼠體內(nèi)。于移植后3、7、14、28、42天測定血糖；免疫組織化學法檢測移植細胞在胰腺中的遷移和分化；放射免疫學方法監(jiān)測胰島素及C-肽水平。
　　 結(jié)果：(1)在高糖或低糖培養(yǎng)基中加入誘導因子尼克酰胺、Exendin-4，細胞趨向形成細胞團，高糖培養(yǎng)條件下細胞成團趨勢更明顯。添加鼠胰腺提取液，細胞內(nèi)顆粒增多、細胞脫落、死亡。(2)誘導組

4、大部分細胞雙硫腙染色呈棕紅色，對照組細胞無陽性著色。(3)誘導組細胞經(jīng)葡萄糖刺激后，能夠分泌胰島素和C-肽。(4)腹腔注射STZ3d后，小鼠血糖均≥16.7mmol/L，出現(xiàn)明顯多飲、多尿等癥狀，確定糖尿病模型造模成功。(5)尾靜脈、腎被膜及胰腺內(nèi)移植組與糖尿病模型對照組相比，血糖均有所降低，胰島素及C-肽均有所增加(P<0.05)，尤以胰腺移植組血糖下降、胰島素和C-肽升高更為顯著。(6)尾靜脈和胰腺內(nèi)移植組的胰腺內(nèi)可見BrdU陽性標