成鼠骨髓基質細胞向神經干細胞誘導分化的實驗研究.pdf

1、[目的]神經干細胞移植治療神經系統(tǒng)疾病是生命科學重要研究內容之一。但是，無論是胚胎或成體的神經干細胞，作為移植細胞尚存在相當大的缺陷。如來源不足，采集困難，免疫排斥，道德倫理及法律等方面的限制。骨髓基質細胞是一種特殊成體干細胞。它具有幾乎和胚胎干細胞一樣多的分化潛能，能誘導分化成幾乎所有的體細胞類型。骨髓基質細胞容易獲取并可用于自體移植，而且可以在一定條件下誘導成神經細胞，這為神經干細胞的應用提供了無限制的來源，克服了從腦組織獲取神經干

2、細胞的危險性和局限性，也避免了胎兒腦組織移植中存在的倫理和免疫排斥問題。本實驗以Sprague Dawley(SD)成年大鼠為實驗對象，研究成年大鼠骨髓基質細胞體外培養(yǎng)的增殖和分化特點，為神經干細胞移植提供更多的理論依據(jù)。 [方法]成年SD大鼠，雌雄不拘，鼠齡5～6月，體重150～200 g。在細胞培養(yǎng)室內超凈工作臺上取材。用股骨、脛骨灌洗法采集成年大鼠骨髓細胞，密度梯度離心法分離出骨髓基質細胞。利用表皮生長因子(epidermal

3、 growth factor，EGF)、 堿性成纖維細胞因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)等增殖及分化誘導因子和神經干細胞培養(yǎng)液進行培養(yǎng)，誘導分化，用細胞免疫組化染色進行細胞鑒定。 [結果]成年大鼠骨髓基質細胞在體外培養(yǎng)48h后，大部分細胞貼壁，部分細胞展開成梭形或扁平狀，漸形成單細胞層。4～7 d出現(xiàn)多個細胞聚集的細胞克隆團，將其機械分離成單細胞懸液，重新種植，4～5 d即有新的細胞克