大鼠骨髓源神經(jīng)干細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞樣細(xì)胞分化的實驗研究.pdf

1、目的：
　　觀察SD大鼠骨髓源神經(jīng)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cells-derived neural stem cells,BMSCs-NSCs）在血管內(nèi)皮細(xì)胞（vascular endothelial cells,VEC）培養(yǎng)條件下是否分化為內(nèi)皮樣細(xì)胞（endothelial-like cells,ELCs）。
　　方法：
　　本實驗采用全骨髓培養(yǎng)法分離培養(yǎng)大鼠雙側(cè)股骨、脛骨以

2、及肱骨的骨髓，利用骨髓源基質(zhì)干細(xì)胞（bonemarrow mesenchymal stem cells,BMSCs）的貼壁生長特性和多次傳代培養(yǎng)使其純化。研究BMSCs的外形改變并繪制P3（Passage3）代細(xì)胞的生長曲線，探討B(tài)MSCs的最適接種密度，利用流式細(xì)胞儀檢測BMSCs標(biāo)志物CD34、CD44、CD45、CD90的表達(dá)情況。將所得P3代BMSCs消化形成單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞密度后置于神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem ce

3、lls，NSCs)誘導(dǎo)培養(yǎng)基（20ng/mL bFGF、20ng/mL EGF、B27）中進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，通過免疫細(xì)胞化學(xué)染色觀察神經(jīng)球表面標(biāo)志物CD133、Nestin的表達(dá)情況。培養(yǎng)所得神經(jīng)球消化形成單細(xì)胞，并進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測VEC表面標(biāo)志物CD31、vWF的表達(dá)情況。將所得NSCs懸液置于Matrigel膠質(zhì)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，觀察是否形成血管腔樣結(jié)構(gòu)。
　　結(jié)果：
　　1．BMSCs早期呈簇狀生長，細(xì)胞呈梭形。P3

4、BMSCs流式細(xì)胞儀檢測顯示CD44陽性細(xì)胞比率為91.4％，CD90陽性細(xì)胞比率為93.7%；CD34、CD45的表達(dá)均呈陰性反應(yīng)。
　　2．P3代細(xì)胞生長曲線呈“S”型，其接種最佳密度區(qū)間在5×104~1×105/mL。
　　3．BMSCs培養(yǎng)1-2天時細(xì)胞聚集呈團(tuán)塊狀，隨后呈“桑葚狀”球形結(jié)構(gòu)，免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示CD133、Nestin的表達(dá)均呈陽性反應(yīng)。
　　4．骨髓源神經(jīng)球在VEC培養(yǎng)基中培養(yǎng)7天時，細(xì)胞呈