大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源的血管內(nèi)皮細(xì)胞貼附ePTFE的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 應(yīng)用大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)來源的血管內(nèi)皮細(xì)胞貼附ePTFE血管壁，并加入肝素共同培養(yǎng)，觀察其對(duì)細(xì)胞貼附效率的影響，探討提高細(xì)胞貼附ePTFE的方法。 方法： 1.MSCs分離和誘導(dǎo)分化培養(yǎng)：在無菌條件下，取SD大鼠長(zhǎng)骨骨髓，經(jīng)密度梯度離心法獲取形態(tài)均一的梭形細(xì)胞；加入10ng/ml內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascularendothelial growth f

2、actor,VEGF)和2ng/ml堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basicfibroblast growth facotr，bFGF)共同培養(yǎng)。 2.誘導(dǎo)細(xì)胞的鑒定：取傳代后第二代實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的兩組細(xì)胞，進(jìn)行免疫組織熒光染色，觀察Ⅷ因子相關(guān)抗原(von Willebrand factor,vWF)的表達(dá)情況，及應(yīng)用透射電鏡觀察細(xì)胞分化后細(xì)胞漿W-P小體的超微結(jié)構(gòu)。 3.細(xì)胞貼壁和貼壁率的測(cè)定：將誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞分成4組，

3、種植于膨體聚四氟乙烯(ePTFE)人工血管上并分別加入濃度為0.10ug/ml、20ug/ml、30ug/ml的肝素培養(yǎng)，每4h檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞貼附率，繪制細(xì)胞貼壁曲線。 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以χ±s表示，采用SPSS13.0軟件方差齊性檢驗(yàn)和單因素方差分析法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢測(cè)。 結(jié)果： 1.經(jīng)密度梯度離心法獲取的MSCs漩渦狀生長(zhǎng)，形態(tài)呈梭形；誘導(dǎo)后細(xì)胞的vWF免疫組織熒光染色呈陽(yáng)性表達(dá)，胞漿呈黃綠色，細(xì)胞輪廓清晰

4、；電鏡下可見血管內(nèi)皮細(xì)胞特征性的W-P小體。 2.誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞在ePTFE的貼附率逐漸升高，于20h時(shí)間點(diǎn)達(dá)到最高，4組貼比率分別是88.34％、96.48％、91.98％、85.69％。 3.肝素能顯著提高血管內(nèi)皮細(xì)胞在ePTFE貼壁率，濃度為20ug/ml肝素的效果最高。 結(jié)論： 1.大鼠MSCs具有向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的能力，能夠?yàn)檠軆?nèi)皮化及組織工程提供理想的種子細(xì)胞。 2.肝素對(duì)M