人骨髓間充質(zhì)干細胞與人臍靜脈內(nèi)皮細胞二者成血管作用的研究.pdf

1、目的:
　　本實驗將人骨髓間充質(zhì)干細胞與人臍靜脈內(nèi)皮細胞二者在體外培養(yǎng)，選擇生長傳代數(shù)適當?shù)膬煞N細胞后分別予以熒光蛋白標記，按一定的細胞比例與I型鼠尾膠原/纖維蛋白混合培養(yǎng)，激光共聚焦掃描顯微鏡下觀察兩種細胞的形態(tài)學變化及相互聯(lián)系，計算不同細胞比例下生成的類血管網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的長度，研究不同細胞比率下成血管網(wǎng)的趨勢及探討血管化種子細胞的最佳比率，為研究后期血管化種子細胞與骨組織材料支架復合奠定基礎。
　　方法:
　　(1)體

2、外培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細胞與人臍靜脈內(nèi)皮細胞，倒置顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)學變化，進行流式細胞學檢測、成骨成脂誘導分化實驗、免疫組織化學鑒定，確定細胞性質(zhì)。
　　(2)慢病毒攜帶增強型綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)染標記人臍靜脈內(nèi)皮細胞，慢病毒攜帶紅色熒光蛋白轉(zhuǎn)染人骨髓間充質(zhì)干細胞，研究轉(zhuǎn)染率最大化時病毒滴度及最佳復感染指數(shù)值（MOI）。
　?。?）制備I型鼠尾膠原/纖維蛋白。
　?。?）培養(yǎng)箱孵育后第1、5、9天激光共聚焦掃描顯微鏡下觀

3、察在鼠尾膠原/人纖維蛋白支架中的類血管狀結(jié)構(gòu)的生成。
　?。?）利用MetaXpress軟件系統(tǒng)中血管生成分析模塊（Angiogenesis）分析比較4種不同細胞比例下生成的類血管網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的長度值。
　?。?）利用DNA萃取法分析I型鼠尾膠原/纖維蛋白支架中最佳細胞比例下細胞的活力與增殖水平。
　　結(jié)果:
　　熒光標記后的人臍靜脈內(nèi)皮細胞和人骨髓間充質(zhì)干細胞激光共聚焦掃描顯微鏡下第1、5、9天連續(xù)觀察發(fā)現(xiàn)在形態(tài)上