神經(jīng)干細胞向神經(jīng)元方向的誘導(dǎo)和分化的研究.pdf

1、目的：探討無血清環(huán)境下聯(lián)合應(yīng)用bFGF、PDGF、Ra、HRG、Forskolin對大鼠神經(jīng)干細胞誘導(dǎo)分化的作用。 方法：用無血清培養(yǎng)技術(shù)從14—16天孕齡胚鼠腦中分離、培養(yǎng)神經(jīng)干細胞：用免疫細胞化學方法對神經(jīng)干細胞進行鑒定，并通過流式細胞儀檢測神經(jīng)干細胞的增殖能力：用傳2-3代的神經(jīng)干細胞接種于多聚賴氨酸包被的玻片，分以下四組，分別為兩步法組、一步法組、血清組和神經(jīng)干細胞培養(yǎng)組(bFGF組)；通過免疫細胞化學技術(shù)，用Map2和

2、Sl00抗體鑒定分化的細胞；通過圖像分析系統(tǒng)來測量神經(jīng)元樣細胞的最長突起長度、胞體周長、胞體面積，神經(jīng)元細胞計數(shù)并計算各組Map2陽性的細胞比例。用全細胞膜片鉗技術(shù)記錄分化后細胞的鈉電流；并且用統(tǒng)計分析軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。 結(jié)果：l、神經(jīng)干細胞的分離、培養(yǎng)、觀察和鑒定：從孕14—15天的胎鼠大腦皮層分離的細胞呈圓形，折光性好；培養(yǎng)6—7天后可以傳代，細胞球邊界清晰，折光性好，立體感強；免疫細胞化學方法鑒定細胞球內(nèi)有較多№st

3、in陽性細胞。流式細胞儀檢測各代細胞球內(nèi)均有較多細胞處于Gl／M和S期。2．神經(jīng)干細胞的誘導(dǎo)分化：Map2的免疫熒光技術(shù)顯示一步法組Map2陽性神經(jīng)元樣細胞的比例最高，為43．35±13．75um，且一步法誘導(dǎo)出的神經(jīng)元樣細胞中有相當多細胞表達TH陽性。圖像分析結(jié)果顯示：一步法組與兩步法組細胞胞體較大，胞體面積分別為136．22±33．08um2、13L45±24．58um2，胞體周長分別為48．63±5．5um、49．3±7．71um

4、，細胞突起長，最長突起分別為123．63±31．48um、¨6．51±38．34μm。統(tǒng)計結(jié)果顯示：①Map2陽性神經(jīng)元樣細胞所占比例：一步法組與血清組有顯著差異，其它各組之間沒有顯著差異。②胞體面積及周長：一步法組與兩步法組之間沒有顯著差異，但它們和其余各組之間都有顯著差異。③突起的長度：一步法組與血清組、bFGF組有顯著差異，與兩步法組之間沒有顯著差異；兩步法組與bFGF組有顯著差異。電生理檢測顯示：一步法組中大部分形態(tài)成熟的神經(jīng)元

5、樣細胞(80％)能誘發(fā)電壓依賴性的Na+通道電流，兩步法僅有少量細胞(20％)能誘發(fā)電壓依賴性的Na+通道電流，而未分化細胞及其它兩組細胞均未記錄到內(nèi)向電流。 結(jié)論：1．培養(yǎng)的原代及傳代后的大鼠胚胎皮層NSCs表達Nestin，并具有自我更新和多向分化的能力。2．在體外無血清條件下聯(lián)合應(yīng)用bFGF、PDGF、RA、HR6、Forskonn對大鼠NSCs向神經(jīng)元定向誘導(dǎo)分化是可行的，能促進NSCs分化成神經(jīng)元。3．在體外無血清條件