降鈣素基因相關(guān)肽促進(jìn)體外培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化.pdf

1、目的：探索降鈣素基因相關(guān)肽(Calcitonin gene-related peptide，CGRP)對(duì)體外培養(yǎng)的新生小鼠室管膜下區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞增殖和分化的影響。
　　方法：分離新生小鼠室管膜下區(qū)組織，經(jīng)機(jī)械法和酶消化法制成單細(xì)胞懸液，抗SOX-2和抗Nestin免疫熒光染色，鑒定分離培養(yǎng)的細(xì)胞。以未添加bFGF和EGF的無血清培養(yǎng)基誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞分化。取體外培養(yǎng)至第3代的神經(jīng)干細(xì)胞，分為4組，分別為對(duì)照組、1nM CGRP組、10

2、nM CGRP組、100nM CGRP組。MTT法尋找體外培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞最佳的增殖時(shí)間，BrdU標(biāo)記法和神經(jīng)球體積測量法來檢測各組之間神經(jīng)干細(xì)胞增殖能力的差異。采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色方法來標(biāo)記神經(jīng)元（Neuronal class IIIβ‐tubulin，Tuj-1）、星形膠質(zhì)細(xì)胞（Glial fibrillary acidic protein，GFAP），并分別統(tǒng)計(jì)體外誘導(dǎo)分化培養(yǎng)3天、7天各組之間Tuj-1陽性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的比例,進(jìn)

3、而比較不同體外培養(yǎng)時(shí)間各組之間神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的能力的強(qiáng)弱。
　　結(jié)果：MTT法提示體外培養(yǎng)4天神經(jīng)干細(xì)胞增殖能力最強(qiáng)。體外培養(yǎng)4天時(shí)，各組之間的BrdU陽性細(xì)胞數(shù)及神經(jīng)球體積無明顯差異。體外誘導(dǎo)分化3天，對(duì)照組、1nM CGRP組、10nM CGRP組、100nM CGRP組中 Tuj-1的百分比分別為(26.1±5.1)％,(28.1±6.1)%,(34.7±4.8)%及(56.0±5)%，其中100nM CGRP組中T

4、uj-1的百分比相對(duì)于其他3組明顯升高（P<0.05）；而體外誘導(dǎo)分化7天，對(duì)照組、1nM CGRP組、10nM CGRP組、100nM CGRP組中 Tuj-1的百分比依次為(45.4±4.2)%,(53.8±4.3)%,(70±2.6)%和(48.8±4.1)%，其中10nM CGRP組中Tuj-1的百分比相對(duì)于其他3組明顯升高（P<0.05）。
　　結(jié)論：CGRP無明顯促進(jìn)體外培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞的增殖作用，但是可以促進(jìn)體外培養(yǎng)