牛磺酸、EDTA和類固醇激素對小鼠胚胎體外發(fā)育的影響.pdf

1、為完善體外培養(yǎng)體系,提高體外發(fā)育的胚胎質(zhì)量,該實(shí)驗(yàn)研究了?；撬?Tau)、EDTA、雌激素(E2)和孕激素(P)對昆明白小鼠胚胎體外發(fā)育的影響.在此基礎(chǔ)上,通過胚胎移植技術(shù)觀察了不同來源的囊胚在移入子宮后的發(fā)育情況,以比較體外培養(yǎng)和體內(nèi)發(fā)育的囊胚質(zhì)量.昆明白小鼠的1-胚胎在M16培養(yǎng)液中呈現(xiàn)典型的2-細(xì)胞發(fā)育阻滯現(xiàn)象.該實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明,M16培養(yǎng)液中分別添加?；撬?M16+Tau)、EDTA(M16+EDTA)、或同時添加牛磺酸和EDTA

2、(M16+Tau+EDTA)都能克服2-細(xì)胞阻滯并發(fā)育到囊胚期.M16+EDTA、M16+Tau、M16+Tau+EDTA組的囊胚率分別為60﹪、61.9﹪、73.6﹪,M16+Tau+EDTA組顯著高于前兩組(P<0.05).且M16+Tau+EDTA培養(yǎng)液中的囊胚總細(xì)胞數(shù)、內(nèi)細(xì)胞團(tuán)數(shù)、內(nèi)細(xì)胞團(tuán)與滋養(yǎng)層細(xì)胞數(shù)的比率均顯著高于M16+Tau和M16+EDTA培養(yǎng)液的(P<0.05);內(nèi)細(xì)胞團(tuán)占總細(xì)胞數(shù)的百分率也相應(yīng)增加.由此說明?；撬岷?/p>

3、EDTA不僅能克服小鼠2-細(xì)胞胚胎的體外發(fā)育阻滯,而且兩者能協(xié)同促進(jìn)囊胚的形成.另外,mM16中不同濃度的牛磺酸也能顯著地影響小鼠1-細(xì)胞胚胎的發(fā)育.該研究結(jié)果顯示,如果mM16培養(yǎng)液中?；撬釢舛葹?mM、2.5mM、5mM和10mM,囊胚率分別為82.7﹪、87﹪、89﹪、87.8﹪;當(dāng)?；撬釢舛确謩e為50mM、100mM,囊胚率分別顯著下降至76﹪、51﹪;當(dāng)?；撬釢舛冗_(dá)到150mM和200mM,1-細(xì)胞胚胎只能發(fā)育到8-細(xì)胞期和-

4、2細(xì)胞期.囊胚平均總細(xì)胞數(shù)在?；撬釢舛葹?mM時為65.7,而在濃度為0mM、2.5mM、10mM、50mM、100mM時都顯著下降,分別為48、57、52、39、23.上述結(jié)果表明,mM16培養(yǎng)液中當(dāng)?；撬釢舛葹?mM時,囊胚率和囊胚平均總細(xì)胞數(shù)均高于其它濃度組.因此,5mM可能是昆明白小鼠胚胎體外發(fā)育最適宜的?；撬釢舛?為研究類固醇激素對胚胎體外發(fā)育的影響,觀察了mM16培養(yǎng)液中添加雌激素(E2)和孕激素(P)后對昆明白小鼠胚胎發(fā)育

5、的影響.結(jié)果顯示,在同時添加E2和P的mM16培養(yǎng)液中小鼠1-細(xì)胞胚胎發(fā)育的囊胚率為93﹪,顯著高于在mM16培養(yǎng)液(對照組)中的87.67﹪(P<0.05);在單獨(dú)添加E2和P的mM16培養(yǎng)液中的囊胚率分別為91﹪、90.3﹪,雖高于對照組,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05).同時添加E2和P的mM16培養(yǎng)液中囊胚的細(xì)胞總數(shù)、內(nèi)細(xì)胞團(tuán)數(shù)、內(nèi)細(xì)胞團(tuán)占總細(xì)胞的百分率和內(nèi)細(xì)胞團(tuán)與滋養(yǎng)層細(xì)胞數(shù)的比率低于體內(nèi)正常發(fā)育囊胚,但顯著高于其它體外培養(yǎng)組(

6、P<0.05).由此說明小鼠胚胎體外培養(yǎng)時同時添加雌激素和孕激素可能通過協(xié)同作用促進(jìn)早期胚胎的發(fā)育和囊胚的形成.在上述研究的基礎(chǔ)上,為評價囊胚質(zhì)量,通過胚胎移植技術(shù),觀察和比較了不同來源的囊胚移植后的發(fā)育情況.分別選取小鼠1-細(xì)胞胚胎在mM16、mM16+E2、mM16+P、mM16+E2+P各組培養(yǎng)液中培養(yǎng)的囊胚、小鼠體外受精-體外培養(yǎng)的囊胚和體內(nèi)正常發(fā)育的囊胚,進(jìn)行子宮內(nèi)移植.結(jié)果顯示:體內(nèi)正常發(fā)育的囊胚移植后的發(fā)育情況最好,其著床

7、率、流產(chǎn)率和出生率分別為90.67﹪、16.18﹪、82.67﹪;mM16+E2+P組的著床率和出生率分別為82.67﹪、34.67﹪;高于其它體外培養(yǎng)組,流產(chǎn)率為45.16﹪,低于其它體外培養(yǎng)組;體外受精組的著床率和出生率分別為53.34﹪、6.67﹪,顯著低于其它各組,流產(chǎn)率為72.5﹪,顯著高于其它組.由此說明,體外受精的胚胎的質(zhì)量顯著低于體內(nèi)受精的;體外培養(yǎng)液中同時添加雌激素和孕激素能協(xié)同促進(jìn)小鼠胚胎的體外發(fā)育,提高胚胎移植后的