膠原蛋白肽氨基酸組成對(duì)小鼠腸道吸收的影響研究.pdf

1、膠原蛋白肽是以動(dòng)物膠原為原料通過(guò)酶法、酸堿法或熱降解法制備而成的多肽混合物，在功能食品、美容護(hù)膚品、疾病防治、藥物控釋材料和診斷輔料等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。膠原蛋白肽具有許多良好的生物活性，包括抗氧化、抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)活性、提高免疫力和預(yù)防骨質(zhì)疏松等。吸收是影響膠原蛋白肽發(fā)揮生物活性的關(guān)鍵，蛋白質(zhì)在降解過(guò)程中產(chǎn)生的部分寡肽可通過(guò)腸道直接被吸收，隨著小肽營(yíng)養(yǎng)的重要性逐漸被人們認(rèn)識(shí)，因此提高膠原肽在腸道內(nèi)的吸收率成為近年的研究熱點(diǎn)，具

2、有重要的意義（楊闖，2003）。
　　膠原蛋白進(jìn)入生物體內(nèi)后，首先在胃蛋白酶的作用下酶解成多肽，進(jìn)入腸道后被胰蛋白酶、糜蛋白酶等進(jìn)一步降解成為寡肽或氨基酸，進(jìn)而被吸收利用。胰蛋白酶是腸道內(nèi)的主要消化酶，其酶切位點(diǎn)位于堿性氨基酸精氨酸(Arg)和賴氨酸(Lys)之后。膠原蛋白肽中Arg和Lys的含量對(duì)其在生物體內(nèi)的吸收差異的影響研究尚未有報(bào)道。
　　本研究將膠原蛋白肽結(jié)合離子交換層析技術(shù)，以液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC/MS)、

3、三重四級(jí)桿質(zhì)譜(TSQ)作為分析手段，對(duì)膠原蛋白肽在小鼠體內(nèi)的吸收情況進(jìn)行分析，結(jié)果表明氨基酸組成影響膠原蛋白肽在小鼠體內(nèi)的吸收，對(duì)于特殊膳食或特殊醫(yī)學(xué)配方食品的研發(fā)具有一定的指導(dǎo)意義。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)分離制備富含堿性、酸性氨基酸的膠原蛋白肽
　　利用盛美諾膠原蛋白肽(CPO)分別經(jīng)過(guò)陽(yáng)離子和陰離子交換層析，分離得到富含堿性氨基酸(CPC)和富含酸性氨基酸的膠原蛋白肽(CPA)，氨基酸組成分析結(jié)果表明CPC富含

4、精氨酸（Arg）和賴氨酸(Lys)，含量比未經(jīng)過(guò)層析分離的多肽(CPO)分別高12.2％和7.4％，而CPA中Arg和Lys含量比CPo低18.3％和26.5％。
　　(2)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
　　借助小鼠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，將制備的兩種膠原蛋白肽（CPC及CPA）與盛美諾膠原蛋白肽(CPO)及空白對(duì)照給小鼠灌胃，取五個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)采集血液，通過(guò)氨基酸組成分析測(cè)定血清中羥脯氨酸的動(dòng)態(tài)變化，結(jié)果表明CPC在吸收峰值時(shí)Hyp的濃度是CPA的1.39倍

5、，CPC在小鼠體內(nèi)吸收效果優(yōu)于CPA。
　　(3)質(zhì)譜分析
　　進(jìn)一步比較CPC及CPA的多肽氨基酸序列的差異，比較其中堿性氨基酸精氨酸和賴氨酸的相對(duì)豐度差異，通過(guò)離子阱質(zhì)譜技術(shù)從CPC中檢測(cè)到9種含Arg或Lys的多肽，其含量遠(yuǎn)大于CPA中的含量，陽(yáng)離子交換處理后含精氨酸和賴氨酸的多肽含量顯著增加。將動(dòng)物實(shí)驗(yàn)獲得的血清進(jìn)行三重四級(jí)桿質(zhì)譜分析，分析其中含有含羥脯氨酸的寡肽含量，從而確定膠原肽在小鼠體內(nèi)的吸收情況。CPC灌胃后