比較移植及體外培養(yǎng)對(duì)小鼠卵巢卵泡早期發(fā)育的影響.pdf

1、小鼠模型被廣泛應(yīng)用于卵巢始基卵泡激活(初始募集)基本規(guī)律及各種生長分化因子調(diào)控作用的研究中。離開體內(nèi)的自然環(huán)境,卵巢必須適應(yīng)環(huán)境的改變,比如二氧化碳濃度、營養(yǎng)供給、溫度及酸堿度。更重要的是,離開體內(nèi)調(diào)節(jié)系統(tǒng)卵泡的生長會(huì)發(fā)生改變。近幾年,卵巢的孵育方法主要包括體外培養(yǎng)和腎被膜下移植。但沒有文獻(xiàn)報(bào)道不同孵育體系對(duì)卵巢發(fā)育的影響,及孵育卵巢和在體卵巢間卵泡發(fā)育的區(qū)別。在本研究中,我們比較了體外培養(yǎng)卵巢、移植卵巢及體內(nèi)生長卵巢中各級(jí)卵泡的數(shù)量。

2、用免疫組化技術(shù)和半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測三個(gè)重要基因的表達(dá)及蛋白定位,包括透明體蛋白3(ZP3)、生長分化因子9(GDF-9)和抗苗勒氏管激素(AMH)。結(jié)果顯示,體外培養(yǎng)加速卵泡激活、延緩發(fā)育卵泡的生長,影響ZP3、GDF-9和AMH蛋白的表達(dá)模式。盡管移植造成少量始基卵泡的丟失,但移植卵巢的特征與體內(nèi)生長卵巢非常相似,這一結(jié)果提示移植可以提供最佳的卵泡孵育環(huán)境。在體外培養(yǎng)體系中,alpha-Modifie Eag

3、le Medium(α-MEM)是較好的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。本實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)研究了孵育卵巢與體內(nèi)生長卵巢間的相同及不同,證明了移植可以最好的模擬體內(nèi)卵巢生長環(huán)境。
　　【目的】探討microRNA-145(miR-145)對(duì)小鼠顆粒細(xì)胞增殖、分化和甾體激素合成的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制。
　　【方法】選擇3周齡未性成熟小鼠卵巢,用原位雜交技術(shù)檢測miR-145的表達(dá)。應(yīng)用機(jī)械法獲取3周齡小鼠卵巢竇狀卵泡中的顆粒細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)。用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶

4、鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測顆粒細(xì)胞中miR-145、分化相關(guān)基因及激素合成酶mRNA的表達(dá)。胸腺嘧啶核苷類似物(EdU)方法檢測顆粒細(xì)胞增殖。用免疫組織化學(xué)法檢測顆粒細(xì)胞分化關(guān)鍵基因蛋白的表達(dá)。
　　【結(jié)果】miR-145在小鼠卵巢竇狀卵泡的顆粒細(xì)胞中高表達(dá),始基卵泡、初級(jí)卵泡、次級(jí)卵泡及卵巢間質(zhì)中未見明顯表達(dá)。在體外培養(yǎng)顆粒細(xì)胞中,miR-145的表達(dá)受卵泡刺激素(FSH)的調(diào)節(jié)。下調(diào)miR-145可顯著抑制顆粒細(xì)胞的增殖、分化