亮氨酸對小鼠卵巢發(fā)育及壽命的影響.pdf

1、目的：為了維持正常的生殖壽命，卵巢中的大部分原始卵泡保持在靜止?fàn)顟B(tài)以供后來之需。近年來的研究表明，mTOR信號通路的激活可能會促進原始卵泡的發(fā)育和耗竭。本課題組的前期研究證實了肥胖可以激活mTOR信號通路，從而加速雌性大鼠及小鼠卵巢卵泡的發(fā)育與消耗。然而，同樣作為mTOR激動劑的亮氨酸是否會影響卵巢卵泡的發(fā)育和儲備目前還不清楚。本研究以成年雌性昆明小鼠為研究對象，用高脂飲食誘導(dǎo)的方法建立肥胖小鼠模型，對比觀察亮氨酸對雌性小鼠卵泡發(fā)育和卵

2、巢儲備的影響以及對mTOR和SIRT1信號通路的調(diào)節(jié)作用。
　　方法：將30只成年雌性昆明小鼠隨機分為對照（normal control，NC）組（自由攝食標(biāo)準(zhǔn)動物飼料，n=10）、亮氨酸（ le uc ine，Le u）組（自由攝食添加了1.2％L-亮氨酸的標(biāo)準(zhǔn)動物飼料，n=10）、高脂（high-fat，HF）組（自由攝食脂肪含量為20%的特制動物飼料， n=10）。在進行3個月的HF組小鼠肥胖模型造模后，Leu組開始亮氨酸飲

3、食干預(yù)8周。實驗開始后每日記錄小鼠攝食量并通過陰道涂片監(jiān)測小鼠動情周期的變化，每周對體重變化進行監(jiān)測。實驗結(jié)束后，處死小鼠，取一側(cè)卵巢進行蘇木素-伊紅染色觀察并計數(shù)各級卵泡數(shù)量，另一側(cè)卵巢通過定量PCR或者蛋白免疫印跡技術(shù)來檢測mTOR信號和SIRT1信號通路中關(guān)鍵因子在mRN A和蛋白的表達水平。
　　結(jié)果：HF組小鼠的攝入能量、體重和內(nèi)臟脂肪重量均顯著高于其他組小鼠，而Leu組小鼠的攝入能量、體重和內(nèi)臟脂肪重量與NC組沒有統(tǒng)計

4、學(xué)差異。Leu組和HF組小鼠的卵巢重量相近，并且都顯著高于NC組，其中Leu組小鼠的卵巢/體重比也高于NC組。卵泡計數(shù)結(jié)果顯示，Le u組和HF組小鼠卵巢中的健康卵泡數(shù)量均少于N C組，而閉鎖卵泡數(shù)量均高于NC組；Leu組的黃體數(shù)和比例與HF組相接近，并且均顯著高于NC組；Leu組的竇狀卵泡數(shù)量與HF組相接近，并且均顯著多于NC組，Leu組的竇狀卵泡比例也高于NC組；Le u組和 HF組小鼠卵巢中的初級卵泡數(shù)量和比例，以及原始卵泡的數(shù)量

5、和比例均顯著少于NC組，其中 Leu組的原始卵泡數(shù)量和比例甚至比 HF組更低。QRT-PCR結(jié)果顯示， Leu組和HF組小鼠卵巢中mTOR和P70S6K的mRNA表達水平均顯著增加，而SIRT1和SIRT6降低；并且HF組中SIRT1和SIRT6的mRNA表達水平比Leu組更低。Western blot結(jié)果顯示，Leu組小鼠卵巢中p-mTOR， p-mTOR/mTOR和p-P70S6K的蛋白表達水平顯著增加，而 SIRT1和 SIRT6

6、的蛋白表達水平顯著降低；HF組中，mTOR， p-mTOR和p-P70S6K的蛋白表達水平也顯著增加，而SIRT1和SIRT6的蛋白表達水平也顯著降低；然而，Leu組中p-mTOR/mTOR的比值和SIRT1的蛋白表達水平均顯著高于HF組。這些結(jié)果提示亮氨酸能激活卵巢卵泡發(fā)育，并且激活mTO R信號通路的作用可能比高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖的作用更強。
　　結(jié)論：與高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖作用類似，高亮氨酸飲食可以通過激活mTOR和抑制SIRT