高蛋白食物對(duì)成年雌性小鼠卵巢卵泡發(fā)育的影響.pdf

1、目的：
　　低碳水化合物-高蛋白食物在糖尿病及肥胖病的飲食治療中相當(dāng)流行，但近年研究報(bào)道，單純高蛋白質(zhì)攝入與高脂和高糖一樣可以誘發(fā)糖尿病、動(dòng)脈粥樣硬化等年齡相關(guān)性疾病，這些疾病的發(fā)生都與mTOR信號(hào)的激活相關(guān)。mTOR信號(hào)通路對(duì)蛋白質(zhì)和氨基酸同樣敏感，但高蛋白攝入是否影響卵巢mTOR信號(hào)和卵泡發(fā)育還不清楚。本實(shí)驗(yàn)以成年雌性昆明小鼠為研究對(duì)象，觀察高蛋白食物對(duì)卵巢卵泡發(fā)育的影響，并對(duì)mTOR信號(hào)通路在其中的作用進(jìn)行探討。
　　

2、方法：
　　將48只雌性昆明小鼠隨機(jī)分為：對(duì)照（normal control，NC）組（自由攝食蛋白占能量比約為20％的標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物飼料，n=12）、高蛋白（high protein，HP）組（自由攝食蛋白占能量比約為41%的特制動(dòng)物飼料，n=12）、低蛋白（low protein，LP）組（自由攝食蛋白占能量比約為9%的特制動(dòng)物飼料，n=12）、低蛋白能量限制（low protein restriction，LPR）組（攝食LP組7

3、0%的蛋白占能量比約為9%的特制動(dòng)物飼料，n=12）。實(shí)驗(yàn)開始后每天陰道涂片觀察小鼠動(dòng)情周期變化并記錄小鼠攝食量，每周監(jiān)測(cè)體重變化。食物干預(yù)16周處死小鼠，取一側(cè)卵巢進(jìn)行組織蘇木精-伊紅染色觀察并計(jì)數(shù)各級(jí)卵泡數(shù)，另一側(cè)卵巢通過實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)和蛋白免疫印跡技術(shù)分別檢測(cè)卵巢組織中mTOR在基因水平和蛋白水平的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　NC組平均攝入能量為18.98±0.90 kcal/d，HP組平均攝入能量為19.74±0.1

4、1 kcal/d，LP組平均攝入能量為19.63±0.10 kcal/d，均為高能量攝入；LPR組平均攝入能量為13.74±0.43 kcal/d，顯著低于NC組（p<0.05）。HP組小鼠體重超過NC組的13%（p<0.05），LP組小鼠體重超過NC組的10%（p<0.05），均為中度肥胖。LPR組小鼠體重為34.8±1.0g，比NC組少15.5%。卵泡計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，HP組、LP組、LPR組各組小鼠卵巢的總卵泡數(shù)與NC組無(wú)差異。盡管各

5、組間存活卵泡計(jì)數(shù)無(wú)差異，但HP組存活卵泡比例比NC組低（P<0.05），而LP組和LPR組存活卵泡比例比NC組高（P<0.05）。HP組閉鎖卵泡數(shù)及其比例顯著高于NC組（P<0.05），LPR組則顯著低于NC組（P<0.05）；LP組閉鎖卵泡數(shù)與NC組無(wú)差異，但閉鎖卵泡比例低于NC組（P<0.05）。HP組和LPR組發(fā)育中卵泡數(shù)與對(duì)照組無(wú)差異，但HP組比例比NC組低（P<0.05），而LPR組比例比NC組高（P<0.05）；LP組發(fā)育中

6、卵泡數(shù)及其比例與NC組無(wú)差異。HP組小鼠原始卵泡數(shù)及比例顯著低于NC組(P<0.05)，相反，黃體數(shù)高于NC組（P<0.05)。LPR組原始卵泡數(shù)及其比例顯著多于NC組(P<0.05)，而黃體低于NC組（P<0.05)。LP組小鼠原始卵泡數(shù)、黃體及其比例與NC組無(wú)差異。Western blot結(jié)果顯示，與NC組相比，HP組小鼠卵巢中mTOR蛋白表達(dá)增多，而LPR組表達(dá)減少，LP組表達(dá)則無(wú)差異。RT-PCR結(jié)果顯示，HP組小鼠卵巢mTOR