高蛋白食物對成年雌性小鼠卵巢卵泡發(fā)育的影響.pdf

1、目的：
　　低碳水化合物-高蛋白食物在糖尿病及肥胖病的飲食治療中相當流行，但近年研究報道，單純高蛋白質攝入與高脂和高糖一樣可以誘發(fā)糖尿病、動脈粥樣硬化等年齡相關性疾病，這些疾病的發(fā)生都與mTOR信號的激活相關。mTOR信號通路對蛋白質和氨基酸同樣敏感，但高蛋白攝入是否影響卵巢mTOR信號和卵泡發(fā)育還不清楚。本實驗以成年雌性昆明小鼠為研究對象，觀察高蛋白食物對卵巢卵泡發(fā)育的影響，并對mTOR信號通路在其中的作用進行探討。
　　

2、方法：
　　將48只雌性昆明小鼠隨機分為：對照（normal control，NC）組（自由攝食蛋白占能量比約為20％的標準動物飼料，n=12）、高蛋白（high protein，HP）組（自由攝食蛋白占能量比約為41%的特制動物飼料，n=12）、低蛋白（low protein，LP）組（自由攝食蛋白占能量比約為9%的特制動物飼料，n=12）、低蛋白能量限制（low protein restriction，LPR）組（攝食LP組7

3、0%的蛋白占能量比約為9%的特制動物飼料，n=12）。實驗開始后每天陰道涂片觀察小鼠動情周期變化并記錄小鼠攝食量，每周監(jiān)測體重變化。食物干預16周處死小鼠，取一側卵巢進行組織蘇木精-伊紅染色觀察并計數各級卵泡數，另一側卵巢通過實時定量PCR技術和蛋白免疫印跡技術分別檢測卵巢組織中mTOR在基因水平和蛋白水平的表達。
　　結果：
　　NC組平均攝入能量為18.98±0.90 kcal/d，HP組平均攝入能量為19.74±0.1

4、1 kcal/d，LP組平均攝入能量為19.63±0.10 kcal/d，均為高能量攝入；LPR組平均攝入能量為13.74±0.43 kcal/d，顯著低于NC組（p<0.05）。HP組小鼠體重超過NC組的13%（p<0.05），LP組小鼠體重超過NC組的10%（p<0.05），均為中度肥胖。LPR組小鼠體重為34.8±1.0g，比NC組少15.5%。卵泡計數結果顯示，HP組、LP組、LPR組各組小鼠卵巢的總卵泡數與NC組無差異。盡管各

5、組間存活卵泡計數無差異，但HP組存活卵泡比例比NC組低（P<0.05），而LP組和LPR組存活卵泡比例比NC組高（P<0.05）。HP組閉鎖卵泡數及其比例顯著高于NC組（P<0.05），LPR組則顯著低于NC組（P<0.05）；LP組閉鎖卵泡數與NC組無差異，但閉鎖卵泡比例低于NC組（P<0.05）。HP組和LPR組發(fā)育中卵泡數與對照組無差異，但HP組比例比NC組低（P<0.05），而LPR組比例比NC組高（P<0.05）；LP組發(fā)育中

6、卵泡數及其比例與NC組無差異。HP組小鼠原始卵泡數及比例顯著低于NC組(P<0.05)，相反，黃體數高于NC組（P<0.05)。LPR組原始卵泡數及其比例顯著多于NC組(P<0.05)，而黃體低于NC組（P<0.05)。LP組小鼠原始卵泡數、黃體及其比例與NC組無差異。Western blot結果顯示，與NC組相比，HP組小鼠卵巢中mTOR蛋白表達增多，而LPR組表達減少，LP組表達則無差異。RT-PCR結果顯示，HP組小鼠卵巢mTOR