小鼠卵巢Evi-1表達水平與卵泡發(fā)育的相關(guān)性研究.pdf

1、Evi-1(the ecotropic viral integration site-1)基因作為一個逆轉(zhuǎn)錄病毒常見的插入位點，首先是在由逆轉(zhuǎn)錄病毒誘發(fā)的急性髓系白血病小鼠(AKXD)中被發(fā)現(xiàn)的。正常情況下，Evi-1基因在人的造血細胞上不表達，但在逆轉(zhuǎn)錄病毒誘導(dǎo)的伴染色體3q26異常的人類髓系白血病細胞上過度表達，3q26染色體也是Evi-1定位的染色體。研究發(fā)現(xiàn)Evi-1是轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)超家族信號通路中重要的調(diào)節(jié)因子，

2、在TGF-β信號通路中發(fā)揮抑制作用。缺失Evi-1基因的小鼠將在胚胎發(fā)育的前幾周因多種生理缺陷而死亡。多項研究證實Evi-1在小鼠的胚胎組織和成體組織中均有表達。但是Evi-1在卵巢中的研究甚少。TGF-β信號通路在卵泡發(fā)育過程中的作用以及Evi-1在其通路中的抑制作用使得我們推測Evi-1在卵泡的發(fā)育過程中可能發(fā)揮某些功能。因此，本實驗的目的在于定位Evi-1在卵巢中的位置并進一步研究其在卵泡發(fā)育過程中的生物學(xué)功能。
　　本實驗

3、結(jié)果顯示:
　　1. Evi-1蛋白定位于卵母細胞質(zhì)中，在顆粒細胞，膜細胞，以及卵母細胞核中均未見其表達。
　　2.早期卵泡發(fā)育組，Evi-1呈現(xiàn)出高表達的狀態(tài)。在出生后1天和4天的小鼠卵巢中，Evi-1的表達量最高。隨著卵泡的發(fā)育，Evi-1在卵母細胞質(zhì)中的表達量逐漸降低，在出生10天和16天的卵巢中呈現(xiàn)出一個中間級的表達量水平。最后在23天的小鼠卵巢中表現(xiàn)出一個最低量的表達。由此可見，隨著卵泡的發(fā)育，Evi-1的表達表現(xiàn)

4、出一個逐級下降的趨勢。
　　3.促性腺激素處理組，Evi-1依舊表達與卵母細胞質(zhì)中，并且隨著卵泡的發(fā)育其表達水平繼續(xù)呈現(xiàn)下降的趨勢。在大的有腔卵泡中，Evi-1的表達已經(jīng)非常低，但是在一些小卵泡中表現(xiàn)出高表達狀態(tài)，大小卵泡的對比明顯。在PMSG24小時處理組中，大的有腔卵泡中可以看到其表達，但是在HCG4小時和HCG11小時的處理組中，大的有腔卵泡中Evi-1的表達已經(jīng)非常非常弱了。最后，在黃體中未見Evi-1的表達。
　　

5、4.發(fā)情周期檢測組，Evi-1主要表達于小卵泡的卵母細胞質(zhì)中。其中，發(fā)現(xiàn) Evi-1在間情期和發(fā)情期中的表達量要略高于發(fā)情前期和發(fā)情后期，提示 Evi-1的表達可能受到激素的調(diào)節(jié)。
　　5.排卵相關(guān)基因的檢測，real-time PCR檢測 Evi-1 mRNA水平和排卵相關(guān)基因(Ptgs2，Tnfaip6，Has2，Cd44，C1qbp)mRNA的水平。在HCG處理4小時后檢測發(fā)現(xiàn)，Evi-1 mRNA的表達水平下調(diào)而上述排卵相